蛋白类有关论文范文检索,与中国农业文网烟台,中国农业大学相关论文怎么写

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3.2.1确定Cry1Ac与受体是否结合

a.可以用免疫电镜进行检测

b.爪蟾卵母细胞表达和双电极电压钳实验技术

3.2.2受体蛋白的表达量下调

受体蛋白的表达量下调,可能是编码该蛋白的基因的启动子区缺失,导致转录因子无法与之结合,从而导致表达量下降.可以通过凝胶阻滞实验来验证该区域的核酸是否发生突变.

3.2.3结合位点的改变

受体结合位点的改变将导致与Cry1Ac的结合能力下降,从而导致抗性的产生,有以下几种研究蛋白互作的方法.

a.酵母双杂交

b.免疫共沉淀

c.双分子荧光互补

d.噬菌体展示技术

e.pull-down技术

f.Far-Western技术

g.蛋白质芯片

h.荧光共振能量会转移

我的实验打算用酵母双杂交和双分子荧光互补来研究蛋白质之间的关系.由于酵母双杂交需要建库比较麻烦,我更倾向于后者双分子荧光互补.

3.2.4凝胶蛋白阻滞

我想蛋白质既然和核酸能相互作用,从而在琼脂糖凝胶电泳上显现出来,结合蛋白的核酸要比未结合蛋白的核酸跑的慢,即显示的分子量较大.同样如果两个蛋白发生相互作用结合到一起,其分子量比他们其中的任何一个都要大,然后做个琼脂糖凝胶电泳,就可以观察到这两个蛋白是否发生相互作用.如果是敏感棉铃虫则受体未发生突变,就能和活化的Bt蛋白发生结合,而抗性棉铃虫由于受体突变,就不能和Bt蛋白质发生结合,分别温浴后做聚丙烯酰胺凝胶电泳,就可以知道是否发生了结合.

3.2.5观察受体与蛋白结晶的结合部位

3.2.5.1X光衍射法

X光衍射具有分辨率高,普遍性高,没有分子量限制,收集数据块,可以自动化,并且可以找出膜蛋白晶体.

3.2.5.2核磁共振法

该方法不需要晶体结晶,精度高,动态结构,接近生理条件下研究蛋白质的相互作用,特别适合研究低亲和力额瞬态复合物.但是有一定的缺点,就是必须用同位素标记,数据处理复杂,目前最大分析30KD260个残基.要求蛋白质不聚合,折叠良好,蛋白质浓度高,但没有X射线衍射分辨率高.

致谢

在上蛋白质组学与分析技术这门课过程中,让我学到了很多实验技术,为我将来的实验打下了坚实的基础.邱老师治学严谨,学识渊博,思想深邃,他对学科前沿敏锐的洞察力以及富于创新和对工作全身心投入的忘我精神,对我产生了很深的影响,是我毕生效仿的榜样.尤其是邱老师的讲课风格,风趣幽默,而且每节课抽出10多分钟的时间进行互动,让我们在轻松愉快的氛围中牢牢掌握所学知识.听了邱老师的课,真的让我受益匪浅,醍醐灌顶.最后再次祝愿邱老师身体健康,工作顺利,阖家欢乐.

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