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FJAT-91和清水为阳性对照和阴性对照,对青枯雷尔氏菌自然突变株FJAT-1441,FJAT-1442,FJAT-1452,FJAT-1465,FJAT-1458和Tn-5插入致弱菌株FJAT-T1,FJAT-T7,FJAT-T33,FJAT-T2,FJAT-T4,FJAT-T5,FJAT-T6,FJAT-T21,FJAT-T12,FJAT-T8,FJAT-T11进行致病性和防效鉴定.由表2-可知,不同的无致病力青枯雷尔氏菌的防效差异很大,阳性对照在接种后第4d开始发病,第8d发病率达到100%.先接种无致病力青枯雷尔氏菌,3d后再接强致病力青枯雷尔氏菌FJAT-91,各无致病力菌株均表现出一定的生防效果.其中自然突变株FJAT-1458防效最好,在整个调查期内发病率为0Tn-5插入致弱菌株中T8防效最好接种致病力青枯雷尔氏菌FJAT-91后第13d发病率仅为5%防效达95%.以不同致病力的青枯雷尔氏菌为样本,以接种强致病力青枯雷尔氏菌后不同时间番茄植株的发病率为指标进行聚类分析,结果如图2-1所示,当欧氏距离为0.6888时,可将各菌株分为三大类,第一类为工程菌FJAT-1458,该类特点为发病率为0,防效达到100%第二类包括菌株FJAT-T8,FJAT-T11,FJAT-1444,FJAT-1465,该类特点为发病率均小于40%防效达到60以上第三类包括FJAT-T1,FJAT-T7,FJAT-T33,FJAT-T2,FJAT-T4,FJAT-T5,FJAT-T6,FJAT-T21,FJAT-1441,FJAT-1442,FJAT-1452,FJAT-T12,该类特点为发病率均大于45%.综上各无致病力青枯雷尔氏菌的防效评价,选出青枯雷尔氏菌自然突变株FJAT-1458作为植物疫苗.

表2-番茄青枯病植物疫苗的筛选Tab.2-2Thescreeningofplantvaccineengineeringbacteriaabouttomatobacterialwilt

菌株发病率(%)4d5d6d7d8d9d10d11d12d13dFJAT-T10.000.000.000.0010.0010.0020.0020.0030.0045.00FJAT-T20.000.0015.0040.0040.0065.0070.0070.0080.00100.00FJAT-T40.000.0025.0045.0050.0065.0075.0075.0080.00100.00FJAT-T50.000.0020.0045.0055.0070.0070.0075.0080.00100.00FJAT-T60.000.0020.0045.0050.0060.0065.0075.0080.00100.00FJAT-T70.000.0010.0020.0040.0040.0045.0055.0060.0060.00FJAT-T80.000.000.000.000.000.000.000.000.005.00FJAT-T110.000.000.000.000.000.000.000.000.0010.00FJAT-T120.000.0010.0010.0030.0050.0050.0070.0080.0090.00FJAT-T210.000.0020.0030.0050.0080.0095.0095.00100.00100.00FJAT-T330.000.000.0015.0025.0030.0050.0050.0060.0060.00FJAT-14410.000.0020.0045.0050.0060.0065.0075.0075.00100.00FJAT-14420.000.0020.0045.0050.0060.0065.0075.0085.00100.00FJAT-14440.000.000.000.000.0010.0010.0020.0020.0020.00FJAT-14520.000.000.0010.0030.0030.0060.0080.0090.00100.00FJAT-14580.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00FJAT-14650.000.000.000.000.0010.0015.0020.0020.0030.00G+0.0010.0060.0090.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00G-0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00

图2-1菌株防效聚类图Fig.2-1ClusteringfigureofbiologicalcontrolefficacyfromdifferentRalstoniasolanacearum

2.3.2番茄青枯病植物疫苗工程菌FJAT-1458的接种浓度对番茄青枯病防效的影响

设定番茄青枯病植物疫苗工程菌FJAT-1458不同接种浓度104cfu/mL,105cfu/mL,106cfu/mL,107cfu/mL,108cfu/mL和清水对照(CK),采用伤根接种法,先接种不同浓度的植物疫苗工程菌FJAT-1458,3d后再接种强致病力青枯雷尔氏菌FJAT-91,接种强致病力青枯雷尔氏菌后每天观察番茄植株的发病情况,统计不同处理番茄植株的发病率,试验结果见表2-和图2-2.当无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458的接种浓度为108cfu/mL,番茄植株出现烧苗症状,清水对照接种强致病力青枯雷尔氏菌FJAT-91后第4d开始发病,番茄植株出现萎蔫症状,并随着时间的推移日益严重,至第10d发病率达100%.分别先接种104cfu/mL,105cfu/mL,106cfu/mL,107cfu/mL,108cfu/mL的植物疫苗工程菌FJAT-1458,再接种接种强致病力青枯雷尔氏菌FJAT-91,至第10d发病率分别为80%,80%,35%,15%和0,防效分别达20%,20%,65%,85%和100%.随着时间推移,植物疫苗工程菌FJAT-1458接种浓度为104cfu/mL和105cfu/mL处理组的发病率在第11d,13d分别达到100%,比对照分别推迟1d和3d植物疫苗工程菌FJAT-1458接种浓度分别为106cfu/mL,107cfu/mL,108cfu/mL的处理组,它们在第20d的防效分别达15%,40%,90%.因此不同浓度植物疫苗工程菌FJAT-1458处理后番茄均能有效减缓青枯病病程发展,当植物疫苗菌株浓度大于1×106cfu/mL时,对番茄青枯病的生防效果明显,并且随着浓度增大,效果越好.接种不同浓度植物疫苗工程菌FJAT-1458对番茄苗效果较好的菌株为108cfu/mL.当生防菌浓度小于1×106cfu/mL时,对番茄青枯病的防效不明显,且防效差异不大.清水处理的CK2均无植株发病.

表2-接种不同倍数的FJAT-1458后番茄青枯病发病率(%)Tab.2-3ThemorbidityoftomatobacterialwiltafterdifferentconcentrationsofFJAT-1458

回接天数(d)稀释不同倍数的植物疫苗cfu/mL)104105106107108ck1ck250.000.000.000.000.0025.000.00625.0025.000.000.000.0040.000.00735.0035.0010.000.000.0085.000.00865.0065.0010.000.000.0085.000.00970.0080.0010.000.000.0095.000.001080.0080.0035.0015.000.00100.000.0011100.0085.0050.0020.000.00100.000.0012100.0095.0055.0030.000.00100.000.0013100.00100.0055.0030.000.00100.000.0014100.00100.0065.0035.000.00100.000.0015100.00100.0075.0045.005.00100.000.0020100.00100.0085.0060.0010.00100.000.0025100.00100.00100.0085.0040.00100.000.00

根据不同浓度无致病力菌株接种处理后番茄青枯病的发病率,绘制发病率的趋势图(图2-2),可看出随着处理的浓度增加,植株的发病率明显降低并推迟植株的发病.

图2-2接种不同浓度FJAT-1458后番茄青枯病的发病率趋势图

Fig.2-2ThemorbiditytendencychartoftomatobacterialwiltdifferentconcentrationsFJAT

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