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微生物相关论文范例,与生物工程领域相关发表论文
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从特定的mRNA分解基因,从蛋白质分离编码基因,化学合成基因,反转录PCR等方法,载体的分类和用途,表达型载体应该具备的性质,表达载体必须能够使外源基因高效表达,通常包括一个强的启动子,启动子下游区和起始密码子上游区有一个好的核糖体结合位点序列,在外源基因插入序列的下游区要有一个强的转录终止序列.表达型载体分为胞内型和分泌型两种.动物宿主中使用较多的是各种病毒载体,猴病毒40(SV40),单纯疱疹病毒(HSV),腺病毒(ADV),痘苗病毒(VCV)和核多角体病毒等.限制性内切酶的命名.基因的体外重组方法.α互补筛选—半乳糖苷酶显色反应的基本原理.真核宿主细胞中筛选出含有重组DNA,主要靠载体或目的基因的特殊标记,例如使用pSC101质粒的抗四环素基因.原核和酵母表达体系,选择高拷贝数的质粒,哺乳类细胞表达体系,使目标基因扩增,提高基因的表达水平.增加表达载体稳定性的措施.高效表达的载体需要强启动子及相关的调控序列.如何保持产物的稳定和活性.应用:表达产物的翻译后的修饰加工,正确的折叠,合适的溶解性和活性保持,需要选择合适的表达体系来满足不同重组药物的要求.
(二)主要的基因工程药物(次重点)
识记:胰岛素,胰岛素样生长因子,白细胞介素,纤溶酶原激活剂,人生长激素,肿瘤
微生物相关论文范例
理解:上述基因工程药物的制备方法
对于新品种的发现速度已经大大下降,其原因是20世纪80年代和90年代由于有了现代重组生物技术的突破,人们可以方便地大规模地生产那些早已经为人所知的治疗用人功能蛋白.但是人们无法在短期内找到更多的有明确作用机制的蛋白药物,所以在2000年以后,基本没有发现或批准基因工程药物,取而代之的是新剂型和新用途的广泛发展.
(三)基因工程药物的生产(一般)
识记:基因工程药物生产的常规基因工程菌株.基因工程的下游工程或后处理技术.蛋白类药物的复性.
理解:基因工程药物的生产的几个特点.动物细胞的培养和发酵对于转化细胞和正常细胞,分别采用悬浮式培养和贴壁培养.保持重组质粒或噬茵体的存在是一个关键的因素,通过常规的菌种纯化和筛选保持生产活力.动物细胞培养基几乎都要加入5-10%的胎牛血清,需要开发高密度,高表达的无血清培养系统与工艺.在开发基因工程下游工程时,较普遍的重视层析技术,超离心技术,萃取技术,膜技术,凝胶沉淀和吸附技术,达到高选择性的分离纯化的同时兼顾产品的生物活性保持.提高重组蛋白质折叠复性的方法有透析,稀释和超滤,添加变性剂,液相色谱法复性,反胶束法和双水相法复性.
应用:基因工程药物生产一般包括细胞培养或发酵,细胞破碎,固液分离,浓缩,纯化,脱水或干燥以及质量分析,检测和监控等.
第五章疫苗技术
一,学习目的与要求
1.了解疫苗的重要作用和发展历程
2.熟悉疫苗的作用机制和种类
3.掌握各类疫苗的基本制备技术以及它们的作用特点
4.了解几种重要疫苗的研究进展
二,考核知识点与考核目标
(一)几种主要类型疫苗的制备技术(重点)
识记:疫苗,活体疫苗,灭活疫苗,亚单位疫苗,核酸疫苗,重组疫苗,疫苗佐剂,治疗性疫苗
理解:活体疫苗只使用一次或两次就可以提供终生的保护,而且反应原性很小,可以同时引发体液免疫和细胞免疫.制备活体疫苗的方法主要有体外减毒,温度敏感突变,变种制备,重配制备,病毒基因修饰或缺失等,掌握它们的基本制备方法.基于蛋白和肽的亚单位疫苗制备技术.以多糖为基础的亚单位疫苗制备技术.核酸疫苗的特点和优势,核酸疫苗的安全性问题如何解决.了解根据物理性质和作用机制,免疫佐剂分为五大类.
应用:目前已有许多预防性的疫苗被获准使用,一些治疗性疫苗也处于临床研究阶段.治疗性的细菌疫苗有结核病,麻风病,幽门螺杆菌,及布鲁菌病等几种慢性感染病,在研究的治疗性的病毒疫苗有HSV-2,乙型肝炎疫苗HBV,HIV,人类乳头状瘤病毒HPV等的治疗性疫苗.
(二)疫苗的作用机制和种类(次重点)
识记:疫苗根据组成主要有三种类型,能够在宿主或者感染细胞中繁殖的微生物构成的活体疫苗,在宿主中不能复制的亚单位疫苗或灭活疫苗,在细胞中可以表达出疫苗抗原的核酸疫苗.
理解:抗原呈递给免疫效应细胞的两条途径,通过组织相容性复合体(MHC)II呈递给CD4+T细胞,刺激B淋巴细胞,产生特异性抗体,通过组织相容性复合体(MHC)I呈递给CD8+T细胞,产生特异性细胞毒T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞,同时呈递给CD4+T细胞,诱发产生保护性抗体.几乎所有免疫保护机制明确,可以产生中和抗体,并已于培养的疫苗都获得成功.
(三)几种重要疫苗的研究进展(一般)
识记:抗HIV疫苗和乙型肝炎疫苗
理解:抗生素的大量应用,滥用,引起了严重的耐药问题,同时许多病毒性疾病目前仍无有效的治疗手段,防治必须依赖疫苗.理想的新型疫苗需要具备安全性,有效性,能够提供多种保护和长期保护,以及稳定和便于使用管理.艾滋病疫苗研制的难度和希望,新型结核菌疫苗的研制和挑战,幽门螺杆菌的危害和疫苗研究,研究新型乙肝疫苗提高无反应人群的免疫反应,克服丙肝的高变异性,嗜血流感杆菌疫苗的作用.
第六章次级代谢产物合成的基因改造
一,学习目的与要求
1.熟悉次级代谢产物的合成途径
2.掌握次级代谢产物合成的调控和次级代谢工程的意义
3.了解聚酮途径和非核糖体肽合成途径,了解组合生物合成的方法
4.了解多酶复合体的异源表达方式和影响因素
二,考核知识点与考核目标
(一)聚酮类和非核糖体肽类化合物的生物合成途径(重点)
识记:聚酮类化合物,Ⅰ型聚酮合酶的组成包括酮合成酶(KS),酰基转移酶(AT),酰基载体蛋白(ACP),β-酮还原酶(KR),脱水酶(DH),烯酰基还原酶(ER),硫酯酶(TE)等,非核糖体肽,多酶复合体,组合生物合成是通过基因工程技术,对复合酶的基因进行操作,调整模块顺序或功能域组成,获得新颖的聚酮类和非核糖体肽类化合物.
理解:聚酮类化合物的生物合成过程和机制,非核糖体肽的生物合成过程和机制,NRPS也有与PKS共存的现象,非核糖体肽作为骨架整合在聚酮中,组合生物合成操作过程中的限制.
应用:聚酮类化合物的分子改造,理论上可以对聚酮合酶的模块或功能域进行敲除,添加,置换等操作,产生新的化合物.通过人工的设计得到"天然"的化合物,对天然复杂生物分子的化学结构修饰,可以改变其活性.
(二)次级代谢产物合成的途径及其调控(次重点)
识记:次级代谢产物,次级代谢工程
理解:次级代谢途径可以简单分为三类,①由初级代谢物转化成生物合成的中间体,②聚合:乙酸-丙二酸,氨基酸,类异戊二烯,糖,③对合成的化合物做进一步修饰.由于次级代谢中酶的专一性水平比较低,导致次级代谢产物丰富多样.次级代谢产物合成的研究方法.次级代谢产物合成的相关的合成基因,抗性基因和调控基因共同组成一个大的基因簇,它们的表达是协同调控的,多功能酶复合体合成的非核糖体肽或核糖体合成的多肽类次级代谢产物,微生物次级代谢产物合成的调控中有所谓的自控因子调节,如链霉菌株产生的A因子等.菌株有目的的选育是通过遗传操作技术来实施的,目标是:①通过提高一个克隆基因的基因数量来提高次级代谢产物的生产能力,②通过不同基因的引入产生次级代谢产物的新类似物,③通过将完整生物合成基因引入一种更方便的菌株实现产物的稳定高产等.
应用:很多微生物很难在实验室条件下培养或生长很慢,将这些编码次级代谢物的基因,组合到更适合的生物体中,如链霉菌中进行合成.
(三)多酶复合体的异原表达(一般)
识记:聚酮类化合物合成的前体,多酶复合体的异原表达的候选宿主
理解:影响聚酮类化合物异源表达的因素有翻译后修饰,底物的利用,跨膜运输蛋白,自我抑制,聚酮类化台物的修饰,其它分子因素如PKSs的折叠以及四维结构的组装,转录和翻译过程的稳定性等.比较几种异原表达候选宿主的特点.
应用:很多有用的聚
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