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范文一
一、立题依据(科学意义及国内外现状分析及参考文献)
恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一,多发生于皮肤,早期发生血行转移.对放、化疗不敏感,在世界范围内发病率增高,人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现！
最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T-钙粘蛋白的表达变化相关.T-钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3]、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少.最近的研究表明T/H&mdash,钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长,降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能[1].T/H&mdash,钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移[10]及维持正常细胞的表型中起重要作用[11].
本文出处 http://www.sxsky.net/xie/090100.html
T/H&mdash,钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机.
T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用,目前还没有相关研究的报道,所以本实验将进行相关方面的探讨性研究！
二、研究内容及预期成果(说明具体研究内容、创新点及拟解决的关键问题、预期成果及提供形式)
研究内容：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况
第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
第三部分：T-cadherin基因的真核表达及生物活性分析
创新点：首次将T-cadherin基因转染黑素瘤细胞
拟解决的关键问题：通过RT-PCR反应扩增出T-cadherin的基因全长.
预期成果及提供形式：
观察T-钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况！
进一步阐明T-钙粘蛋
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T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况,探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法！
三、研究方案(包括研究方法、技术路线、研究进度安排)
研究方法：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况
免疫组织化学和免疫细胞化学
1.材料：从正常人皮肤切取的痣组织,人黑色素瘤细胞株
2.主要试剂和溶液
(1)第一抗体：兔抗人T-cadherin抗体
(2)第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG
(3)三抗&rdquo,：链亲和霉素标记HRP
3.设备
4.方法
(1)冷冻切片的免疫染色程序
(2)活细胞的免疫染色程序
5.荧光显微镜检
注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照
阳性对照(正常组织),
阴性对照(PBS代替一抗)以证明抗体的特异性.
第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
1.材料：
(1)组织和细胞
(2)菌株与质粒
(3)工具酶
(4)试剂
(5)仪器
2.方法
(1)引物的设计
(2)总RNA的提取：异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法
(3)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量,观察所提RNA有无明显降解,
(4)逆转录RT反应：为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照
(5)PCR扩增：利用上下游引物,在DNA聚合酶下对目的片段进行扩增,PCR过程设&beta,-actin为内对照
(6)PCR产物的回收、纯化
(7)PCR产物的克隆
(8)DNA序列测定
(9)真核重组表达质粒的构建
(10)阳性重组质粒的鉴定和筛选
(11)质粒的大量提取
(12)转染黑色素瘤细胞
第三部分：T-钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析
1.材料
2.方法
(1)转染细胞的培养
(2)Western印迹法检测转染后蛋白的表达
(3)流式细胞周期分析
(4)凋亡的检测
技术路线图：
研究进度安排：
2004.9&mdash,&mdash,2005.7学习学位课程,查阅文献,完成课题设计
2005.9&mdash,&mdash,2006.9基本完成实验研究工作
2006.10&mdash,&mdash,2007.3完成实验补遗工作并进行统计分析,撰写论文
2007.4&mdash,&mdash,2007.6论文答辩
四、经费预算
试剂费用：15000元<,
BR>,组织及细胞：1000元
文献资料费：500元
论文打印费：1000元
答辩费：1500元
总计：19000元
五、课题可行性分析
实验在导师的指导下进行,导师段昕所教授、主任医师对黑色素瘤的诊断治疗、检测方法和研究进展有深入的了解,对本课题的研究设计及实验有重要的指导意义.
已完成黑色素瘤及T-钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作.
所有实验均在承德医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成.实验室的老师实验技术熟练,在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导,实验所需的科研仪器设备实验室均具备.
参考文献:
1.Toyooka,KO.,ToyookaS.,VirmaniAK.,SathyanarayanaUGetalCancerRes2001Jun1,61(11):4556&mdash,60
2.Lee,S.W.,1996Nat.Med,2:776&mdash,782
3.Zhong,Y.,Y.Delgado.,J.Gomez,S.W.Leeetal2001ClinCancerRes.
4.Takeuchi,M.,Misaki,A.,Chen,B.K.,etal(1999)Histopathology,35,87&mdash,8
5.Kawakami,M.,Staub,J.,Cliby,W.,etal1999Int.J.Oncol.,15,715&mdash,720
6.Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,etal(1998)Hum.Ge.,43,285&mdash,286
7.Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,etal(1998)Hum.Ge.,103,96&mdash,101
8.Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,etal(1999)BrJ.Cancer,80,556&mdash,562
9.Lee.S.W(1996)Nat.Med.,2,776&mdash,782
10.Hung.Z.Y.,Wu,Y.,Hedric,N&,Gutmann,D.H(2003)MolCell.Biol23,566-578
11.LeeSW.,Reimercl.,CampbellDB.,etal1998Jun,19(6):1157-9
范文二
选题依据、目的和意义：骨折不愈合是骨科临床常见病症,其中以四肢长骨多发,例如胫骨,股骨,肱骨等,针对四肢长骨骨折不愈合二次手术我院多才用植骨术配合LCP重新内固定.自体髂骨作为植骨材料具有较多的优点：如取材简单、组织相容性好、无移植排斥反应、骨诱导作用强等,这些优点使得髂骨成为一种最佳的植骨供材,这在临床上已形成共识.植骨是治疗骨折不愈合的重要方法,其机制是爬行替代所引起的支架作用与供给矿物质的作用,爬行替代顺利进行的条件要求准确的复位、充分的植骨和坚强的固定.为达到充分的植骨,及早促进骨折愈合,我们采用髓内外36°,植骨的方法,外用钢丝环扎,配合LCP坚强内固定,术后3~1个月内进行随访,根据愈合情况和功能恢复情况分析手术的临床疗效.选题目地在于探讨治疗四肢长骨骨折不愈合的手术改进方法和疗效,为临床治疗提供参考.
本课题以导师多年的临床资料为依据,通过对骨折不愈合手术治疗的国内外文献进行系统整理,结合山东中医药大学附属医院骨科病房对四肢长骨骨折不愈合患者的随访调查及回顾性分析,根据骨科特殊生物力学特点和导师治疗骨折不愈合的多年临床体会,分析治疗效果,并对手术中的细节问题做初步探讨与论述.同时也希望可以通过对导师的临床实践的研究、总结,能为今后的临床工作提供一些帮助和指导.
本课题目前国内外研究的动态、水平治疗骨折不愈合,可分为手术治疗和非手术治疗,其中手术治疗最重要的就是植骨术加更改断端内固定.骨折不愈合应用自体骨移植治疗效果显著,已经形成共识.植骨是治疗骨不连的重要方法,植骨方式临床多采用髓内外联合植骨.沿肌间隙进入,骨膜下小心剥离显露骨折部位,取出内固定器械,清除骨断端间瘢痕,咬除硬化骨,打通髓腔,修整骨折端,手法复位,按照骨缺损情况取骨.髓内植骨以比髓腔稍粗的骨棒,贴紧髓腔骨质,髓外上盖植骨宜用螺丝钉固定植骨块,骨碎屑充分填充残余的空隙,这样才能确实达到植骨的目的和要求.自体皮-松质骨植骨的爬行替代缩短了骨折愈合过程,新鲜的自体骨具&
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