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化学发光方面有关论文范文,与血清肌酐测定方法学进展其评价相关论文答辩开场白
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法主要有：反应前利用白陶土、Fuller’s土或硅酸铝土吸附肌酐,用吸附样品中的肌酐再进行Jaffé反应以提高反应的特异性；根据肌酐-苦味酸络合物与假肌酐-苦味酸络合物色泽稳定性差异,通过酸化过程利用“二次读数法”来计算“真肌酐”的浓度；我国临床实验室常用的方法是根据苦味酸与肌酐反应速率与其干扰物的速率不同,利用“速率法”测血清中的肌酐浓度.如乙酰乙酸在20s内与碱性苦味酸完成反应,其他多数干扰物在80s后才与苦味酸有较快的反应,而在20～80s之间,肌酐的反应占绝对优势,故选择25～60s的反应速度,增加了特异性.但根据严格的试验评价,某些假肌酐的正干扰以及高胆红素血症的负干扰仍很难清除.为此又有速率法合并其他手段,如去除蛋白、加胆红素氧化酶或氰化钾以消除高胆红素的负干扰[34,38].3.7酶法[39~48]：酶法测定肌酐主要是利用肌酐酶催化肌酐水解生成肌酸及其逆反应.肌氨酸氧化酶法灵敏度高,线性范围宽,试剂稳定性好.其主要干扰物为样品中肌酸,为去除肌酸的干扰,可采用双试剂法,在试剂中去除肌酸的干扰.双试剂两点法还具有适合于自动化分析的优点.肌酐酶耦联肌氨酸氧化酶法的指示系统是Trinder反应,Trinder系统明显受维生素C的干扰,笔者所使用的反应体系中已加入抗坏血酸氧化酶以消除之.此外,胆红素和多巴胺在一定程度上有负干扰,血红蛋白有正干扰,故对明显溶血或高胆红素血清样品应做自身空白.肌酐亚胺水解酶法用肌酐亚氨基水解酶水解肌酐产生N-甲基乙内酰脲和NH3,再以谷氨酸脱氢酶催化α-酮戊二酸和NH3在NADPH供氢的条件下生成谷氨酸,然后测定340nm处吸光度降低速率求得肌酐含量.对多种可能的干扰物的试验表明,白蛋白、免疫球蛋白、血红蛋白[39]、乳糜、抗坏血酸、溶血以及常用药物均不干扰此方法.
但该法的主要缺点是试剂不够稳定.此法线性范围为1760μmol/L,在测定尿液肌酐时须稀释.
酶法测定肌酐又可分干片法、速率法及终点法.①干片法：用反射式光度原理制成的干化学自动分析仪,操作简便、快速,精密度、准确性及抗干扰的能力最好,特别适合于急诊化验,目前已在许多医院应用,但由于其价格昂贵,限制了它的使用.②速率法和终点法测定肌酐价格虽也较贵,但其测定结果相对准确,重复性较好,对自动生化分析仪的比色杯、管路影响较小,因此在临床中已得到广泛应用,但存在的一个非常大的问题是测定灵敏度非常低,50μmoL/L的肌酐其吸光度仅为0.020左右,测定时必须扣除血清本底颜色所产生的吸光度,否则对于正常水平的肌酐测定将产生30%~100%不等的正误差,给临床带来误诊.
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4肌酐测定方法的方法学评价
同位素稀释质谱法、拉曼散射法、高效液相层析法不适用于大批量临床标本的分析,通常只作为肌酐测定的参考方法,所以临床一般不采用这些方法测定；毛细管电泳法虽然测定的线性范围宽,操作较为简便,但需用特殊设备和进行血清标本的预处理,临床常规使用较困难,不为广泛应用；碱性苦味酸法和酶法测定肌酐现被临床所广泛应用.但这两种方法存在难点以克服的缺点,影响检测结果[5].
4.1碱性苦味酸法：由于假性肌酐的干扰,人们对碱性苦味酸法进行了各种改进,以提高测定结果的真实性,并实现自动化分析,但没有从根本上改变存在非特异反应的问题.另外,碱性苦味酸是一种强腐蚀剂,对全自动生化分析仪有很大的腐蚀作用,缩短仪器的使用寿命.近年来,多采用抗干扰能力较强的“两点法”,但此法不能消除非肌酐色素的干扰,用碱性苦味酸法测定高胆红素标本时肌酐的测定值偏低.碱性苦味酸法不断改良,但是其线性范围和抗干扰能力都是无法和酶法相提并论的.
4.2酶法：酶法试剂盒抗干扰力比苦味酸法强,标本用量少,污染少,适用于全自动生化分析仪.有文献报道了速率法和终点法测定血清肌酐,显色体系多为4-氨基安替比林-酚衍生物-过氧化氢-POD体系,该体系在设计试剂时将酚衍生物放在试剂一,由于酚衍生物如TOOS易与肌酸酶、肌氨酸氧化酶结合生成沉淀使酶失去反应活性,因此无法在试剂一中设置相对多的肌酸酶和肌氨酸氧化酶,很多应用此体系构建的测定试剂在测试时发现内源性肌酸清除能力不强,检测结果存在较大偏差.另外,速率法和终点法测定肌酐存在的一个非常大的问题是测定灵敏度非常低,只适合部分全自动生化分析仪使用.
5肌酐测定方法的方法学发展方向及化学发光检测技术在手工法检测血清肌酐中的应用潜力展望
经典的Jaffe’s方法测定肌酐的主要缺点是特异性差,反应受许多非特异性“色源”物质的干扰,其误差较大.根据Jaffe’s方法符合一级动力学机制建立的速率法是目前临床实验室常用的方法,该方法在一定程度上改进了Jaffe’s方法的特异性,但干扰问题依然存在,并且黄疸血清对测定结果有明显的负干扰[50].
在肌酐酶法测定方法中,终点法是目前应用最为广泛的方法,速率法虽然有文献报道,但未见于临床实际应用,这两种方法目前存在的最大问题是抗肌酸干扰能力不强,测定试剂稳定性差,只适合于部分自动生化分析仪使用,且由于受灵敏度的限制不能实现手工法检测.因此如何改进现有的肌酐酶法测定方法及试剂,并发展高灵敏度的检测体系,以实现手工匀相法检测,是发展血清肌酐测定新方法的重要方向.
化学发光(chemiluminescence,CL)是产生于化学反应过程中的一种光辐射.其发光机制是：化学反应的反应物或生成物吸收了反应释放的化学能由基态跃迁至电子激发态,再由激发态的最低振动能级返回基态,同时将能量以光辐射的形式释放出来,产生化学发光.化学发光分析法是借助化学发光现象而建立起来的一种分析方法,此方法不需要复杂的仪器,不需要光源(从而减少或消除瑞利散射和拉曼散射)和色散装置,没有光学分析方法中常见的散射光和杂散光的干扰,大大提高了信噪比,因而具有灵敏度高、线性范围宽的优点[49].近年来己被广泛应用于生命科学、临床医学、环境检测、食品分析以及农业分析等各个领域.化学发光反应一般来说多为氧化反应,许多氧化剂已用于化学发光分析,例如过氧化氢、次卤酸盐、高锰酸盐[51]、高碘酸盐以及硫酸沛(IV)等[52].
本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文随着生物酶检测技术研发的深入,现在越来越多的研究者将此和化学发光技术结合起来,其中利用化学发光法检测血清肌酐将可能成为以后研究的重点和热点,因为肌酐经过生化反应后产生过氧化氢,利用化学发光技术检测过氧化氢已见国内外文献有诸多报道,但大多数是在碱性体系下测定过氧化氢的,而近中性条件多见于鲁米诺电致化学发光学,但都不大适合临床生化条件产生过氧化氢的检测,所以研究一种抗干扰能力强、测定灵敏度高、重复性好、价钱低廉,能真实反映血清肌酐含量的化学发光检测技术,不仅具有重要的理论价值,也具有重要的实际意义.
【参考文献】
[1]MurrayRK,Granner,MayesPA,etal.Harper’sBiochemistry.24thedition,Stamford：AppletonandLange,1996.
[2]LeveyAS,PerroneRD,MadiasnE.Serumcreatinineandrenalfunction.AnnuRevMed,1988,39(3)：465~490.
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