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统计学相关论文范文,与黄柏的显微定量相关论文格式范文
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(1．辽宁中医药大学附属医院,辽宁沈阳110032；2．辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032)
摘 要：目的：利用显微定量法测定黄柏质量.方法：采用容量分析手段,测定黄柏粉末中的石细胞的显微特征数,并采用高效液相法对黄柏的指标成分盐酸小檗碱进行了含量测定；对得到的两组数据进行相关分析.结果：得到了黄柏药材的石细胞显微特征数及盐酸小檗碱含量；二者有显著的相关性.结论：利用显微定量法测定黄柏质量是科学、可行的.
关 键 词：显微定量法；黄柏；相关分析
中图分类号：R284 文献标识码：A文章编号：1673-7717(2007)05-0964-03
显微定量法是利用药材自身的某种显微特征具有固定常数的特点,采用容量分析法测定药材含量的一种中药鉴定方法.上世纪70年代以来,已有学者对中药的显微定量法进行了初步研究,涉及到43味中药36味中成药,其研究结果都表明,利用显微定量法来检测中成药中药材的投料量是科学、可行的.该法所用仪器简单,试药易得,操作简便,对中成药中主药、贵重药和有毒药可从形态特征大体上判断其数量,在一定程度上可保证中成药的质量及用药的安全有效.但显微定量法研究尚属探索阶段,中成药生产、供应、使用等部门至今很少应用,尚需要进一步深入研究,以使该方法可以在基层检测中得到切实的开展和使用.本实验以常用皮类药材黄柏为研究对象,对显微定量法在中药研究中的应用进行了较系统的研究.
黄柏为芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseShneid.的干燥树皮.性寒,味苦,归肾、膀胱经.具有清热燥湿,泻火除蒸,解毒疗疮的功效.常用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋、骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹瘙痒.黄柏粉末绿黄色或黄色,纤维鲜黄色.直径16－38p,m,常成束,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维.石细胞鲜黄色,类圆形或纺锤形,直径35～128μm,有的呈分枝状,枝端锐尖,壁厚,层纹明显.
利用显微定量法对黄柏的专属性显微特征――石细胞,进行了显微定量分析,得到了黄柏石细胞的显微特征常数,并与黄柏指标成分小檗碱的含量测定结果进行了相关分析.
1仪器与试剂(原料 药材)
1.1仪器 XS－213生物显微镜；OLYMPUSSystemBio-logicMicroscopeBX-50生物显微镜；OLYMPUSDP-10Camera；电子分析天平－岛津AY220；岛津LC-6A高效液相色谱仪；微量移液器(WKY型－球晶生化试剂仪器有限公司).
1.2试剂 水合氯醛(沈阳沈一精细化学品有限公司批号20030218)；甘油(沈阳市医药公司化玻站试剂分装厂2002年9月16日出品)；甲醇(色谱纯沈阳化学试剂厂批号200401011)；磷酸(分析纯天津市天河化学试剂厂批号20041124)；盐酸小檗碱(中国生物药品检定所110713－200208).
1.3药材所有实验样品经辽宁中医药大学鉴定教研室翟延君、李峰教授鉴定,均为正品黄柏.
2方法与结果
2.1显微定量法优化条件选择 考虑到影响样品混悬效果的因素主要有样品重量、样品的粉碎粒度、混悬剂的组成,并且各因素的考察水平有所不同,故本实验采用均匀设计法考察显微定量法的优化条件.实验采用U6(63)均匀设计表,具体实验安排见表2.
取2号来源样品,粉碎,分别过80和100目筛.精密称定100、200、300、400、500、600mg共6份,分别用水合氯醛试液多次水飞,并入25mL量瓶中,按均匀设计表加入相应甘油量,最后用水合氯醛试液定容.对上述6份混悬液,分别用微量移液器精取0.02mL进行显微装片,每份溶液平行制10片,于显微镜下观察石细胞并计数.以每份样品的变异系数为考察指标,通过均匀设计软件得出优化结果.
均匀设计软件给出的结果：Y等于0.2163+0.0006×X1-0.0001×X1×X3×0.0002×X2×X3；RR等于0.9999；F等于1482.3591；Ymin等于0.0729；A1-A2等于600,80,17.5.
即优化条件为：样品称样量600mg左右,粉碎过80目筛,加入甘油17.5mL.对优化结果的验证实验结果见表4.验证结果中,各份样品的变异系数均与优化条件给出的最小变异系数(0.0729)接近,说明由均匀设计软件给出的优化条件是科学、准确的.
2.2黄柏药材中的水分测定 按2005版《中华人民共和国药典》附录4中烘干法,测定各样品含水量.
2.3黄柏各样品的显微特征常数测定 按照均匀设计得到的优化条件,取各样品(80目),分别精密称定.各加17.5mL甘油,以水合氯醛试液多次水飞,分别定容于25mL容量瓶中,精密吸取0.02mL溶液,分别平行装片10张,观察石细胞,计数.
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2.4高效液相法测定黄柏盐酸小檗碱的含量①色谱条件与系统适应性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：磷酸水(40:60)为流动相；检测波长为265nm.②对照品溶液的制备：精密称取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品适量,加流动相制成每lmL含0.1mg的溶液,即得.③供试品溶液的制备：取本品粉末(过3号筛)约0.1g,精密称定,置100mL量瓶中,加流动相80mL,超声处理(功率250W,频率40kHz)40min,放冷,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得.④测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL注入液相色谱仪,测定,即得.⑤测定结果：见表6.
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2.5相关分析 用数学方法对黄柏的盐酸小檗碱含量与石细胞显微特征常数做相关性分析,其中6号样品盐酸小檗碱含量过低,疑为提取过的药材,将此组数据舍弃.结果表明,它们之间有显著的相关性.其结果如下：Y等于0.0155X+0.4513,r等于0.9806,F等于74.8966,P等于0.0032.P＜0.01,有极显著的统计学意义.
药典规定,黄柏按干燥品计算,含小檗碱以盐酸小檗碱(C20H18CINO4)计,不得少于3.0％.由所得回归方程可知,含量达到标准的黄柏粉末中石细胞的显微特征常数应不少于164.43个/mg.
3讨论
本次实验采用的是显微定量法中的容量分析法测定黄柏单味药显微特征常数及中成药二妙丸中黄柏的百分含量,定容和制片很关键,精密称定药品后要用水合氯醛多次水飞,全部转移至25mL容量瓶中,定容后,精密吸取0.02mL装片,装片前枪头要润洗3次,每次吸取前都要充分摇匀,使吸取的溶液浓度达到均匀状态,以减少误差.盖盖玻片时一定要将0.02mL溶液全部覆盖,避免外溢现象导致误差出现.在显微镜下视野要全部观察到且不可重复计数.
黄柏中的石细胞由于较大,粉碎后过80目筛,有的石细胞较完整,有的已被破碎.观察时对能看到完整胞腔和细胞壁的石细胞计为一个单位；对于破碎的石细胞最小单位计为0.5个；对只能看到细胞壁看不到胞腔的石细胞不计数.
2005版药典规定用高效液相色谱法测定黄柏时,流动相采用乙腈－0.1％磷酸溶液(50:50),但在实际测定过程中分离度差,色谱峰不能充分分离,所以改用甲醇一磷酸水溶液(40:60),所得色谱分离度高,色谱峰能充分分离.
百盛药店所购黄柏药材的含量测定值过低,怀疑有掺伪或被提取过的可能,故在做相关分析时没有计人数据.
按照2005版《中华人民共和国药典》的规定,黄柏中盐酸小檗碱的含量应不低于3％,但在收集的实验样品中,虽均为正品,含量合格的却很少.说明目前市场中黄柏的质量并不乐观.因此,寻找检验黄柏质量的有效方法是非常必要的.
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