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关于瘢痕方面论文范文参考文献,与瘢痕疙瘩p53基因检测试剂盒的临床应用相关毕业论文提纲

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[摘要]目的：在浙江地区对瘢痕疙瘩p53基因检测试剂盒进行临床实验,评价此试剂盒的准确度和有效性.方法：采用聚合酶链反应-反向点杂交方法建立的试剂盒检测了浙江地区75例瘢痕疙瘩患者与75例正常对照的p53基因第72位密码子多态性位点的基因型.结果：瘢痕疙瘩组的Pro等位基因及Pro/Pro基因型频率明显高于对照组(P值分别为0.014、0.015),Pro/Pro基因型者患瘢痕疙瘩的风险性明显增高(OR等于2.404,95%CI:1.182～4.887).结论：p53基因检测试剂盒可以预测瘢痕疙瘩高危个体,对于临床诊断和治疗方面也有一定的指导意义,并具有良好的可重复性和特异性.

[关键词]瘢痕疙瘩；p53基因；基因多态性检测；试剂盒

[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2008）05-03

Theapplicationofp53genedetectionkitforsuscepbilityofkeloid

ZHUOYang,GAOJian-hua,ZENGXing-ye,HUANGDa-dao,PANRuo-wang,CAOXiao-en

(DepartmentofSurgery,the118thHospitalofPLA,Wenzhou325000,Zhejiang,China)

Abstract：ObjectiveToinvestigatethekeloidtestingboxofp53genebyclinicexperimentandjudgeitsvalidityandaccuracyinZhejiangProvince,China.MethodsThep53genotypesweredeterminedbypolymerasechainreaction-reversedotblot(PCR-RDB)thatthekitadoptamong75patientswithkeloidand75unrelatedhealthycontrolsfromZhejiangProvince.ResultsThefrequencyofthep53ProalleleandthePro/Progenotypeamongkeloidpatientswassignificantlyhigherthanthatamonghealthycontrols(P等于0.014、0.015respectively).Thep53Pro/Progenotypesignificantlyincreasedtheriskfordevelopingkeloid,paredtothebinationofPro/ArgandArg/Arggenotypes,withtheoddsratio(OR)of2.404(95%CI:1.182～4.887).ConclusionThep53genedetectionkitcanbeusedtopredicatehigh-riskindividualsforkeloid,itisusefultoclinicaldiagnoseandtherapyeffectsmonitoring.Thekeloidtestingboxisspecificandvaluabletorepeateddetection.

Keywords：keloid,p53gene,genepolymorphismdetection,reagentkit

瘢痕疙瘩属于病理性瘢痕,是由于结缔组织对创伤的过度增生反应而形成.研究结果提示瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生发展中起着重要作用[1].p53基因是重要的细胞周期调节、凋亡基因,在多种肿瘤细胞中均可发现p53蛋白的聚集现象,并与p53基因突变或缺失有关[2].随着分子遗传学的进展,了解遗传因素在疾病中的作用将有利于疾病的诊断、治疗和预防,也有助于了解环境因素在疾病发生中的作用.我们的前期工作已发现p53基因第72密码子多态性与瘢痕疙瘩的发生存在关联关系,

关于瘢痕方面论文范文参考文献在此,我们在浙江地区应用此试剂盒对瘢痕疙瘩临床患者做相关检查,检验其有效性,为临床瘢痕疙瘩的预防和治疗提供可靠的途径.

如何写瘢痕硕士小论文
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1材料和方法

1.1试剂盒组成（一个试剂盒可检测10份样品）

1.2需自备的仪器及试剂：PCR仪及分子杂交箱,2×SSC～0.1%SDS(20×SSC40ml,10%SDS4ml,加H2O至400ml,调pH至7.4)；0.5×SSC～0.1%SDS（20×SSC5ml,10%SDS2ml,加H2O至200ml,调pH至7.4）；0.1M柠檬酸钠(柠檬酸钠14.7g溶于450ml水,用浓HCl调pH至5.0,最后定容至500ml)

1.3p53基因特异性寡核苷酸(ASO)探针膜条制备过程

1.3.1p53基因特异性寡核苷酸探针设计：应用PrimerPremier5.0设计探针,氨基标记,探针序列分别为：NH2-5′-TGCTCCCCGCGTGGCCCCT-3′；NH2-5′-TGCTCCCCCCGTGGCCCCT-3′,由上海生工生物公司合成.

1.3.2膜条制备：用打印机在硝酸纤维素膜上打印好标记格和编号.先用10%EDC（乙基二甲基氨基丙基碳二亚胺）浸泡膜条,充分处理10min,继用蒸馏水洗数次,然后把膜条摊在滤纸或吸水纸上晾干.待干透后,取1μlASO点膜,反应15min,再用0.1mol/LNaOH处理,晾干后保存备用.

1.4标本来源：瘢痕疙瘩患者和正常对照人群均为浙江地区汉族居民.瘢痕疙瘩患者均经本院临床及病理诊断证实,共75例,其中男41例、女34例,年龄9～53岁,平均年龄26.8岁.本实验采用随机-对照研究,正常对照组为有外伤史而非瘢痕体质且无瘢痕疙瘩家族史的健康居民,共75例,两匹配组间无血缘关系且无肿瘤病史,其年龄、性别大致相同,用于基因检测的DNA全部来源于研究对象的外周静脉血,血样本用枸橼酸钠抗凝,置于-80℃保存备用.

1.5操作步骤

1.5.1待测样品基因组DNA提取：采用北京赛百胜生物技术有限公司的基因组DNA提取试剂盒提取DNA.

1.5.2PCR反应用于扩增p53基因第72位密码子的引物5′端标记了非同位素检测介质Biotin,引物序列为：Bio-5′-GACCTGGTCCTCTGACTGCT-3′；Bio-5′-GATACGGCCAGGCATTGAAG-3′,由上海生工生物公司合成.反应在PE-480型扩增仪(美国PE公司)上进行.在50μl反应总体积中,含引物8.0pmol/L,DNA模板1μl,加入2UTaq酶(鼎国生物公司).热循环参数：95℃热启动4min后,95℃1min,68℃2min,35个循环后,72℃延伸5min.取3μl扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察结果(图1).

1.5.3杂交：固化上寡核苷酸探针的膜条连同40μlPCR产物加入含5ml2×SSC～0.1%SDS的试管中,100℃水浴变性7min,置杂交仪中42℃杂交3～6h；然后放入42℃预热的0.5×SSC～0.1%SDS中洗膜10min；将膜条转入含2.5U辣根过氧化物酶连链酶抗生素蛋白的10ml2×SSC～0.1%SDS试管中,室温反应15min；再用2×SSC～0.1%SDS洗膜5min×2次；最后,将膜条转入20ml显色液[19ml0.1mol/L柠檬酸钠(pH5.0)中加30%过氧化氢3μl和0.1mg/mlTMB]中避光显色5～15min,期间观察、记录结果.

瘢痕疙瘩p53基因检测试剂盒的临床应用参考属性评定
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