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统计学有关论文范文资料,与金标法与酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的方法学比较相关发表论文
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【摘 要】目的对金标法与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)进行方法学比较.方法对1024份健康体检血清标本同时用金标法和ELISA检测HBsAg,以ELISA为标准,对金标法的灵敏度、特异性进行评价.结果以ELISA为标准,1024份血清中金标法有5份假阴性,9份假阳性,灵敏度为99.51％,特异度为99.12％,准确度为98.63&
统计学有关论文范文资料
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【关 键 词】乙肝表面抗原；金标法；酶联免疫吸附法
乙型肝炎是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一,我国为乙型肝炎病毒感染的高流行区,正常人群的乙肝表面抗原(HBsAg)携带率一般为10％～15.目前检测HBsAg的方法以酶联免疫吸附法(ELISA)为代表,该法以其操作简便、快速、灵敏、准确、重复性好、无放射污染等特点被广泛使用；金标法(Goldimmnnochromatog-raphy,GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术,由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点,也广泛应用于HBsAg的初筛.本文对两种方法检测结果进行比较,探讨其差异性.
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1 材料与方法
1.1标本来源来自2009年4～8月北京军区北戴河疗养院体检人员、门诊患者及疗养人员1024例,其中男615例,女409例.抽取静脉血3mL,标本静置后离心取血清.
1.2方法
1.2.1金标法严格按照使用说明书的要求操作,在层析扩散正常的情况下,质控区出现1条紫红色条带,测试区未出现紫红色条带为阴性；质控区和测试区均出现紫红色条带为阳性；仅测试区出现,质控区未出现紫红色条带,结果无效.HBsAg金标试纸条加样后15～20min观察结果,30min后出现的反应线视为无效.
1.2.2ELISA采用双抗体夹心法原理在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其他试剂,检测人血清或血浆中的HBsAg.严格按照说明书进行操作.
2 试剂与仪器
金标法快速测试条由浙江杭州艾康生物技术有限公司提供(批号：200805164／d),ELISA试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供(批号：X20090101),酶标仪：Ray-m6000,洗板机：Rayt03000,恒温箱：WMZK-02,加样器：M148023.
3 结果
金标法与ELISA检测HBsAg的比较,在1024份标本中ELISA检出HBsAg阳性92份,阳性率为8.98％；金标法有5份假阴性,9份假阳性,阳性率为9.37％,灵敏度为94.56％,特异度为99.03％.两法结果经配对计数资料的x2检验,x2等于0.0469,结果显示两种方法测定的HBsAg结果间差异无统计学意义,P>0.05.但漏检率仍为5.4％,误差率为0.88％,准确度为98.63％(表1).
4 讨论
用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维索膜,配以红色乳胶标记的抗(HBsAg)单克隆抗体HBsAb,应用双抗体夹心法原理,定性检测血清或血浆中HBsAg.
本实验结果表明,金标法与ELISA法的灵敏度有差异,金标法的灵敏度稍低于ELISA法.目前,国产的HBsAg胶体金试纸条检测灵敏度已达到1ng／mL,而ELISA试剂的灵敏度可达0.5ng／mL,这可能是造成ELISA法检测弱阳性标本金标法检测阴性的主要原因,还有金标法存在的一个重要的问题就是层析的速度,如果速度过快,HBsAg未能与试纸条上的HBsAb结合,就越过了检测线,弱阳性样本还未显示,这也可能导致漏检.国内作者报道,由于金标法易受环境、湿度、反应时间及加样量的影响,对于低滴度HBsAg感染者极易造成漏检.ELISA法检测HBsAg以灵敏度高、特异性强、可进行定量和半定量测定尤为突出,重复性好,可进行批量检测,但操作步骤相对繁琐,试剂实际要求严格,影响因素多.因此实验室要结合工作情况合理选用试验方法.
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