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【摘 要】目的建立茯苓多糖的分离、纯化以及含量测定方法.对茯苓块、茯苓片和茯苓粉的不同时间的水煎液中多糖、总糖含量进行测定和比较.方法采用苯酚-硫酸比色法于490nm处测定茯苓多糖、总糖的含量.结果不同时间的水煎液中,茯苓块和茯苓片的多糖、总糖含量明显低于茯苓粉.结论该法快速、准确,便于实际应用,并为茯苓饮片加工与规范化炮制提供部分参考数据.

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【关 键 词】茯苓；饮片；多糖；含量测定

茯苓（Poriacocoswolf）为多孔菌科植物干燥菌核.其性甘、淡、平.归心、肺、脾、肾经.具有健脾宁心,利水渗湿等功效.用于治疗水肿尿少,脾虚食少,便溏泻泄,惊悸失眠等症.主要含有β-茯苓聚糖即茯苓多糖、茯苓糖,茯苓酸等化学成分.具有抗菌抗肿瘤,提高免疫功能的作用,并且对血液系统也有一定的影响.长期以来,茯苓的炮制方法都是将其切制成块或厚片,市场上销售的茯苓块最厚可达2cm,茯苓片的厚度也接近2cm.为了考察饮片规格对水煎液中所含多糖、总糖的影响[1],对不同规格的饮片,在不同煎煮时间的水煎液中的有效成分进行分析.

1实验材料与试剂

UV-2201型分光光度计（岛津）；METTLERAE240电子分析天平（瑞士）；

茯苓（河南省药材公司购买,产地：云南）；葡萄糖对照品（基准）；其他试剂均为分析纯.

2方法

2．1粗糖的提取将茯苓药材分为片,块和粉（粉碎得到）,其中片分为0.2cm和0．4cm两种；块分为0．8cm、1．4cm两种；茯苓粉分为过10目和过50目两种.分别取上述药材各10g,置烧杯中,加水100ml,称重,浸泡20min,分别煎煮20、40、60min,随时加水至近似原体积,检查浸透情况,可以看出,茯苓粉的浸透情况要明显好于茯苓片和茯苓块.放凉后称重,补充水分至原重,过滤,滤液备用.

2．2供试液的制备

2．2．1多糖精密吸取不同规格茯苓水煎液10ml,水浴蒸干,加水2ml溶解,再加无水乙醇10ml,放置4h,过滤,沉淀用85%乙醇适量洗涤２次,残渣用热水溶解并转移到100ml量瓶中,冷却,加水定容.

2．2．2总糖精密吸取不同规格茯苓水煎液10ml,置100ml量瓶中,加水定容,取出1．0ml置10ml量瓶中,加水定容.

2．3实验条件的选择

2．3．1测定波长的选择精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0ml和供试品溶液1．0ml,加入5%苯酚1．0ml,然后加入5．0ml浓硫酸,摇匀,放至室温后测定波长在400～520nm之间的吸收度,结果表明两者均在490nm处有最大吸收.

2．3．2苯酚用量的选择精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0ml,依次加入不等量的5%苯酚,再加入浓硫酸5．0ml,放至室温后测定吸收度,结果表明5%苯酚用量为1．0ml时吸收度最大.

2．3．3浓硫酸用量的选择精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0ml,加苯酚1．0ml,依次加入不等量的浓硫酸,放至室温后测定吸收度,结果表明浓硫酸用量为5．0ml时吸收度最大.

2．3．4标准曲线的绘制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0．1000g,加蒸馏水溶解,定容至1000ml,制成标准溶液.分别精密吸取该溶液1．0、2．0、3．0、4．0、5．0ml,置10ml容量瓶中,加水定容,从中精密吸取1．0ml,加入5%苯酚1．0ml,浓硫酸5．0ml,放至室温,同时做空白,于490nm处测定吸收度,以吸收度A为纵坐标,葡萄糖浓度C为横坐标,绘制标准曲线,得到回归方程如下：Y等于11．6248X+0．0169(r2等于0．9990),结果表明线性关系良好.

2．3．5重复性试验按最佳条件制备5份样品,测定其吸收度,得RSD等于1．2%,结果表明重复性良好.

2．3．6稳定性试验按最佳条件制备5份样品,测定其吸收度,得RSD等于1．3%,结果表明稳定性良好.

2．3．7精密度试验精密吸取供试液1ml,按含量测定项下操作,平行操作5份,同时吸取1ml葡萄糖对照品溶液同法操作,测定其吸收度,得RSD等于2．01%.结果表明精密度良好.

3含量测定结果

3．1多糖：分别取多糖供试液1．0ml,加入5%苯酚1．0ml,后加入浓硫酸5．0ml,同时做空白,测定吸收度.结果见表1.

01

3．2总糖：分别取总糖供试液1．0ml,加入5%苯酚1．0ml,后加入浓硫酸5．0ml,同时做空白,测定吸收度.结果见表2.

4讨论

4．1多糖在强酸作用下水解生成单糖,并迅速脱水生成糠醛,糠醛与酚性物质如苯酚缩合成有色化合物,反应迅速、完整,有色物质稳定,并且有色物质生成量与多糖浓度存在定量关系[2],这样用分光光度法在适当波长处可以得到多糖含量,本法简便快捷,适用,是测定多糖含量较为经典的方法之一.

4．2实验结果表明,茯苓块和茯苓片,在不同的煎煮时间中多糖、总糖的含量明显低于茯苓粉,特别是茯苓块煎出含量最少.但茯苓粉在过滤时比较困难,并且在煎煮时不好控制.因此,茯苓临床入药做汤剂时最好粉碎一下或切制成薄片,这样会减少药材的用量而提高有效成分的煎出量.

参考文献

1丰朝霞,张鸿.分光光度法测定茯苓中多糖含量.时珍国医国药,2000,11（2）：109.

2潘琦,金文.茯苓多糖的含量测定分析.云南中医药杂志,1999,20（1）：33.

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