统计学相关论文例文,与宫颈癌中p53基因多态性的检测其临床意义相关论文开题报告

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【摘 要】目的探讨p53基因多态性在宫颈癌中的表达及其临床意义.方法采用等位基因特异性PCR(allelespecificpolymorphismchainreaction,ASP)的方法检测p53基因型在46例宫颈癌患者及84例对照者中的表达.采用SPSS14.0软件分析p53基因多态性与宫颈癌临床特征的关系.结果p53基因多态性分析显示,Pro/pro基因型在宫颈癌和对照组中的表达差异有统计学意义.HPV状态分层分析,HPV阴性者中Pro/pro基因型在宫颈癌和对照组中的表达差异有统计学意义,HPV阳性者则无显著统计学差异.p53基因多态性与患者的年龄、宫颈癌的临床分期、组织类型、细胞分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移均无显著相关.不同临床分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移的宫颈癌中Pro/pro基因型表达差异与HPV状态无显著相关.结论p53基因72密码子Pro/pro基因型可能是HPV阴性妇女患宫颈癌的高危因素.p53基因多态性与宫颈癌临床病理性特征无相关性.

【关 键 词】宫颈癌；p53；基因多态性；临床意义

Detectionofp53genepolymorphismincervicalcanceranditsclinicalimplication

LICanyu,ZHANGZisen,LIUJihong.DepartmentofGynecologyandObstetric,TheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofp53polymorphismanditsrelationshipwithclinicalcharactersofcervicalcaner.MethodsDNAcollectedfromsmearwasexaminedbyASP(allelespecificpolymorphismchainreaction)in46cervicalcancerand84controlgroups.SPSS14.0softwarewasusedtoanalyzestatisticaldifference.ResultsPro/progenotypefrequencyshowedsignificantdifferencebetweenpatientsofcervicalcancerandcontrolgroup.ThedifferencewasfoundonlyinHPVnegativepatients,butnotinHPVpositiveonesaftersubgroupanalysis.p53polymorphismhadnocorrelationwithpatients’ageatdiagnosis,clinicalstage,histopathologytypes,celldifferentiation,tumorsizeandlymphnodemetastasis.Pro/progenotypefrequencybetweenclinicalstage,histopathologytypes,celldifferentiation,tumorsizeandlymphnodemetastasiswerefoundnocorrelationtoHPVstatus.ConclusionPro/progenotypeofp53polymorphismmayplayveryimportantroleinHPVnegativepatientsofcervicalcancer.p53genepolymorphimhasnocorrelationwithpathologicalfeatures.

【Keywords】Cervicalcancer,p53,Genepolymorphism,Clinicalimplication

宫颈癌在我国妇女中的发病率仅次于乳腺癌,位居第二位.p53基因结构的改变已被发现与多种肿瘤的发生有关,大约50%的恶性肿瘤中发现有p53基因的突变［1］.p53基因第72密码子的多态性与恶性肿瘤发生的关系成为近年研究的热点.StoreyA［2］等的研究发现p53基因72位密码子Arg/arg基因型是发生宫颈癌的风险因素,然而在欧洲和亚洲的群体研究结果中并未得到证实［36］.最近研究中发现,p53基因72位密码子Pro/pro基因型的高频率可能与乳腺癌、鼻咽癌、结肠癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤的发生相关［710］.本研究就p53基因72位密码子Pro/pro基因型与宫颈癌的关系作了初步探讨.

1材料与方法

1.1病例选择取2002年9月至2004年5月经中山大学肿瘤防治中心妇科收治、经病理证实的宫颈癌患者46例作为病例组,良性疾病患者84例为对照组.病例组中位年龄40.9岁,对照组中位年龄43.8岁,两组患者具有可比性.根据FIGO(2003)分期,宫颈癌组中Ⅰa1期4例,Ⅰb1期24例,Ⅰb2期6例,Ⅱa期10例,Ⅱb期2例；组织类型：鳞癌40例,腺癌3例,腺鳞癌3例；细胞分化：Ⅰ级2例,Ⅱ级8例,Ⅲ级29例,分级不明7例；有淋巴结转移6例,无淋巴结转移40例；宫颈癌体的平均直径为3.25cm.

1.2试验方法

1.2.1标本的取材及DNA的提取于治疗前取每个患者的宫颈涂片,用95％的乙醇固定15min.每张涂片用裂解液(50mmol/LTrisHClpH等于8.5,1mmol/LEDTA,0.5%Tween,100μg/ml蛋白酶K)约100μl,溶解涂片上的宫颈分泌物,将其转到500μl的离心管中,置于37℃的恒温箱中温育过夜,95℃加热8min灭活蛋白酶K,5000×g离心5min取上清液存于80℃冰箱中备用,或直接用于PCR检测.

1.2.2p53基因多态性的检测用等位基因特异性PCR(allelespecificPCR,ASP)对提取的DNA进行扩增(GeneAmpPCRsystem9700),引物序列同StoreyA［3］等的研究.以杂合型细胞DNA为阳性对照,双蒸水为阴性对照.对扩增的阳性对照的PCR产物进行测序,并与Genebank中的人类基因组DNA序列(TheHumanGenomeReferenceDNASequence)进行对比,证实阳性对照的扩增产物为人p53基因第4外显子的片段,且符合率为98％.反应的总体积为25μl,包括双蒸水14.8μl,10mmol/L10×Buffer(含Mg2+)2.5μl,10mmol/LdNTP0.5μl,引物2μl(0.5U/μl),TaqDNA聚合酶0.2μl和模板DNA5μl.试剂均购自申博生物制品有限公司.PCR的循环条件为：94℃4min；然后94℃1min、60℃1.5min、72℃1min共30个循环；最后72℃5min.

1.2.3p53基因多态性产物电泳含1×TAE的缓冲液的电泳槽内,PCR产物在2％琼脂凝胶(含1％的溴化乙啶)中电泳30min(100V,33mA),紫外光下观察.p53基因多态性检测中,引物pro+/p53扩增的产物为177bp,引物p53+/arg扩增的产物为141bp.若扩增产物只有一条141bp的条带,则基因型为Arg/arg纯合子；若扩增产物只有一条177bp的条带,则基因型为Pro/pro纯合子；若扩增产物同时出现上述两条条带,则基因型为Arg/Pro杂合子.

1.3统计学处理统计宫颈癌组患者的年龄、p53基因型分布、临床分期、组织类型、肿瘤细胞分化、肿瘤大小、淋巴结转移与否.用SPSS14.0统计学软件进行统计分析,采用四格表、列联表进行χ2检验比较基因型的分布差异,采用t检验和χ2检验比较p53基因多态性与宫颈癌临床特征之间的关系.P<0.05

为差异有统计学意义.

2结果

2.1p53基因型在宫颈癌与宫颈良性疾病中的分布对宫颈癌组及对照组的HPV状态和Pro/pro基因型进行PCR检测,结果显示宫颈癌组中HPV阳性率为47.8％,对照组中HPV阳性率为20.2％.在所有研究对象中,宫颈癌组Pro/pro基因型频率高于良性疾病对照组,对比差异有统计学意义(OR,3.056,95%CI,1.0768.678),而其他基因型的比较未显示统计学差异(P>0.05).以HPV状态进行分层分析,结果显示在HPV检测为阴性的研究对象中,Pro/pro基因型的频率在宫颈癌组高于良性疾病对照组,在两组之间差异有统计学意义(OR:5.250,95%CI:1.33520.646),而在HPV检测为阳性的研究对象中,Pro/pro基因型频率在宫颈癌和对照组之间差异无统计学意义(OR:1.037

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