小鼠有关论文范文参考文献,与免疫性卵巢早衰小鼠生殖能力的相关毕业设计论文

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[摘 要]目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠动情周期、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、受孕率的影响.方法：以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型.设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,观察动情周期、受孕率,ELISA法检测外周血清FSH、E2水平.结果：模型组小鼠动情周期紊乱,FSH增高,E2降低,受孕率低下.左归丸各剂量组动情周期时间延长,但仍有规律性变化.FSH升高及E2降低均不明显,受孕率也低下.结论：模型组卵巢功能损伤、破坏.左归丸能改善、保护卵巢功能,但对受孕率改善不明显.

[关 键 词]卵巢早衰；左归丸；动情周期；FSH；E2；受孕率

[中图分类号]R711[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2008）02（c）-013-03

Reproductivecapacityofimmuneprematureovarianfailuremice

ZHULing,LUOSong-ping,XULi-mian

（DepartmentofGynecology,TheFirstAffiliatedHospital,GuangzhouUniversityofTCM,Guangzhou510405,China）

[Abstract]Objective:ToprobetheeffectofZuoguiPill(ZGP),aChinesepoundrecipefortonifyingShen,onestrouscycle,FSH、E2andconceptionrateofmice.inmicewithimmuneprematureovarianfailure(POF).Methods:BALB/cfemalemicemodelofPOFwasestablishedbymultiplesitessubcutaneousinjectionofzonapellucida3ofmice,andtreatedwithdifferentdosageZGPoflow,middleandhighone,withprednisoneanddiaethylstilbestrolaspositivecontrol.Observedestrouscycleofmiceandconceptionrate.DetectedFSHandE2inperipheralbloodserumbyELISA.Results:TheestrouscycleofPOFmodelsweredisorder.ThelevelofFSHincreasedandE2decreased.Theconceptionratebeelow.TheperiodofestrouscycleprolongedinthemiceofdifferentdosageZGP,butstillkeptregularityperiod.ThechangeofFSHandE2isnotsignificant.Theconceptionratewasloweralso.Conclusion:TheovarianfunctionishurtanddestroyedinimmunePOFmice.ZGPcanimproveandpreservetheovarianfunction,butnotimprovesignificantlyconceptionrate.

[Keywords]Prematureovarianfailure,ZuoguiPill,Estrouscycle,FSH,E2,Conceptionrate

卵巢早衰（prematureovarianfailure,POF）是指女性在40岁前出现卵巢功能衰退,主要表现为月经稀发或持续闭经,常伴烘热、多汗、失眠等躯体症状,及出现焦虑、抑郁、敏感、敌对、压抑,阴道干涩,性交痛、性生活不满意等不适[1].骨质疏松、心血管疾病等患者发生可较自然绝经者提前10年,妊娠主要依赖卵子捐赠[2],是一类严重影响妇女身心健康的疾病.左归丸具有补肾精、养精血、化瘀血之功,临床治疗卵巢早衰有一定的疗效[3].

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物SPF级BABL/c雌性小鼠110只,雄性小鼠20只,体重18～22g,由广东省医学实验动物中心提供,动物合格证号：粤监证字2006A019,动物实验环境监测合格证号：粤监证字2006C082.雌、雄按6∶1的比例用有分隔的饲养笼饲养,以诱导小鼠的正常发情周期.每天阴道脱落细胞涂片,观察动物的发情周期.选择有规律动情周期的小鼠进行实验（以2个动情周期计算）.

1.1.2药物与试剂

1.1.2.1小鼠透明带多肽溶液小鼠透明带3（ZP3）的第330～342个氨基酸序列（NSSSSQFQIHGPR）,其分析纯度>95%,杭州中肽生化有限公司生产,批号：P00074.

1.1.2.2弗氏完全佐剂美国Sigma公司产品,批号：075K8915；弗氏不完全佐剂：美国Sigma公司产品,批号：105K8907.

1.1.2.3醋酸泼尼松片中山市三才医药集团有限公司生产,批号：200503116.

1.1.2.4己烯雌酚山东鲁抗辰欣药业有限公司生产,批号：051103201.

1.1.2.5左归丸由熟地24g、山药12g、枸杞子12g、山茱萸12g、川牛膝12g、菟丝子9g、鹿角胶12g、龟板胶12g组成,龟板胶由南方医院中药房提供,其余中药由广州中医药大学第一附属医院中药房提供.

1.1.2.6其他FSH酶联免疫试剂盒(pg/ml)：批号：3332303EIA.E2酶联免疫试剂盒(pg/ml)：批号：311303EIA.以上试剂由美国UNIONHONEST公司生产.

1.1.3主要仪器酶标仪：德国BIO-RAD生产,Model：550.

1.2方法

1.2.1POF模型制备称取2mgZP3透明带多肽粉末,加入2ml三蒸水配成溶液,取1ml溶液稀释至6ml溶液,与弗氏完全佐剂按1∶1比例配制成免疫试剂,与弗氏不完全佐剂按1:1比例配制成免疫强化试剂.按文献方法造模[4],每鼠取0.15ml免疫试剂皮下多点注射双后脚掌及腹腔,14d后以免疫强化试剂0.15ml皮下多点注射小鼠双后脚掌及腹腔加强免疫.

1.2.2分组随机分为空白对照组、模型组、佐剂组、泼尼松组、己烯雌酚组、左归丸低剂量组、左归丸中剂量组、左归丸高剂量组.

1.2.3给药除空白对照组及佐剂组外,模型组及其余组小鼠于双后脚掌及腹腔皮下多点注射免疫试剂0.15ml,空白对照组注射生理盐水0.15ml,佐剂组注射弗氏完全佐剂0.15ml；14d后各组动物于双后脚掌及腹腔皮下多点注射新鲜配制的免疫强化试剂,空白对照组再次注射生理盐水0.15ml,佐剂组注射弗氏不完全佐剂0.15ml；第二次免疫后第6天各药物开始组灌胃给药.其中泼尼松按20mg/(人d),根据小鼠与人的体表面积进行换算,用冷开水溶解药片,制成溶液,调整浓度,使每毫升溶液含泼尼松0.17mg.己烯雌酚按1mg/(人d),根据小鼠与人的体表面积进行换算,用冷开水溶解药片,制成溶液,调整浓度,使每毫升溶液含己烯雌酚0.009mg.中药组除鹿角胶、龟板胶外,其余药物均水煎后去渣,纳鹿角胶及龟板胶烊化,浓缩,调配浓度,使低剂量左归丸溶液每毫升含生药0.5g；中剂量左归丸溶液每毫升含生药1g；高剂量左归丸溶液每毫升含生药2g.每只小鼠灌胃量均为0.3ml,空白对照组、模型组、佐剂组灌胃相同量蒸馏水.连续灌胃4周,每周休息1d.

1.2.4动情周期观察从小鼠第一次免疫起,各组动物每天早上8:00进行阴道脱落细胞涂片观察动情周期的变化.小鼠动情周期为4～6d,即每4～6天内出现动情前期、动情期、动情后期、动情间期的周期性变化,则记为一次规则的动情周期；如杂乱无章,或持续某一个时期无变化,则记为无规则动情周期,以6d为界,如6d以上,则以出现的天数除以6,折为无规则动情周期的次数.

1.2.5FSH、E2检测于给药4周后眼眶采血,离心,取血清采用ELASA法检测,按试剂盒说明书操作.

1.2.6妊娠率检测于第二次免疫后1周开始灌胃给药（同1.2.3）,连续给药4周.将雌性小鼠与雄性小鼠以2∶1比例合笼饲养,每天观察动物的阴道栓,把有阴道栓的雌性小鼠取出,没有的继续雌雄合笼饲养,配种维持时间为4d.3周后处死动物,解剖子宫,观察动物的妊娠率.

1.3统计学方法

采用SPSS10.0统计软件,计数资料采用χ2检验,计量资料采用均数±标准差（

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2结果

2.1免疫性POF小鼠的动情周期变化

免疫后,模型组小鼠逐渐表现为动情周期紊乱,仅有动情后期和动情间期,或仅有动情前期、动情期,或表现为持续的动情间期,阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量上皮细胞.己烯雌酚组也表现动情周期紊乱,主要为持续的动情期,阴道细胞涂片主要表现大量角化细胞.中药各组也有动情周期紊乱的表现,但主要为动情周期时间延长,仍有动情前期、动情期、动情后期、动情间期的规律性变化.

按免疫后1～14d、15～35d、36～55d三个不同的时段及1～55d整个时段统计有规则的动情周期及无规则的动情周期（表1）,对结果进行χ2检验,其中1～14d：χ2等

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