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论文摘 要：目的验证氨金黄敏颗粒的微生物限度检查方法是否适用于该供试品的检查.方法细菌计数采用低速离心―培养基稀释法,霉菌及酵母菌计数按常规检查法,控制菌按常规检查法.结果稀释剂对照组的菌回收率大于70%,试验组的菌回收率大于70%；阴性对照组未检出阴性对照菌,试验组检出阳性试验菌.结论可以用该微生物限度检查法进行氨金黄敏颗粒的检查.

主题词：氨金黄敏颗粒检验

中图分类号：R122.1+2

为了保证检验方法的科学性,现对某公司生产的氨金黄敏颗粒的微生物限度检查方法进行方法学验证.

一、材料与仪器

1、试验样品药品名称：氨金黄敏颗粒,批号：090901、090902、090903.

2.验证用仪器

电热恒温干燥箱、电冰箱、电热恒温培养箱、恒温水浴锅、离心机、蒸汽灭菌锅、集菌仪等.

玻璃器皿锥形瓶、培养皿、量筒、试管、吸管等.

3、验证用菌种金黄色葡萄球菌；大肠埃希菌；枯草芽孢杆菌；白色念珠菌；黑曲霉.

4、验证用培养基及稀释剂营养琼脂培养基；玫瑰红钠琼脂培养基；胆盐乳糖培养基；营养肉汤培养基；改良马丁培养基；曙红亚甲蓝琼脂培养基.

二、验证条件

无菌室环境洁净度为10000级,局部洁净度为100级,净化消毒30min以上,供试品及灭菌的器具等经传递窗紫外杀菌灯照射30min置无菌室内,试验人员手消毒后穿无菌服进入操作间.

三、方法与结果

1、菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物接种于营养肉汤培养基中,于35℃培养18～24小时,分别取各菌种培养液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中,10倍依次稀释,金黄色葡萄球菌稀释至10-5

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接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,于23～28℃培养23～48小时,取培养液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中,10倍依次稀释至10-5,约为50～100cfu/ml,备用.

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取黑曲霉的新鲜斜面培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液5ml将孢子洗下,吸取此溶液1ml置一个无菌的比色管中,加0.9%无菌氯化钠溶液适量与标准比浊管进行比浊,取比浊后的菌悬液1ml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中,10倍依次稀释至10-4,约为50～100cfu/ml,备用.

2、供试液制备取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪分散混匀,作为1∶10的供试液.

试验组细菌计数采用低速离心―培养基稀释法,取1∶10供试液10ml,500转/分离心5分钟,取全部上清液,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液补足至原量,混匀,再从中取1ml分别加入5个平皿中（每皿0.2ml）,加入各阳性细菌试验菌1ml,立即倾注相应的琼脂培养基,置32℃恒温培养箱中培养48h,测定细菌数.霉菌及酵母菌计数采用常规法,取1∶10供试液1ml,加入各霉菌及酵母菌试验菌1ml,立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基,置25℃恒温培养箱中培养72h,测定霉菌及酵母菌数.

菌液组取稀释好的各菌液1ml,分别加入平皿中,加入相应培养基,置规定条件培养,测定所加的试验菌数.

供试品对照组按试验组方法,测定供试品本底菌数.

稀释剂对照组取稀释剂替代供试液,方法同试验组.

试验组菌回收率（%）等于{（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数}×100%

稀释剂对照组菌回收率（%）等于（稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数）×100%

试验组取1∶10的供试液10ml,置无菌条件下离心（500转/分）5分钟,取上清液置无菌试管中,pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液补足至原量,混匀,加至胆盐乳糖培养基100ml中,再加阳性对照菌大肠埃希菌菌液1ml,摇匀,置35～37℃恒温培养箱中培养18～24小时.大肠埃希菌浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证.

阴性对照组方法同试验组,加入1ml阴性菌（即金黄色葡萄球菌,浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证）,置35～37℃恒温培养箱中培养18～24小时.

3.5结果分析

3.5.1细菌、霉菌及酵母菌计数验证结论在三次试验中,稀释剂对照组的菌回收率均大于70%,试验组的菌回收率均大于70%,故可照供试液制备方法和计数法测定氨金黄敏颗粒的细菌、霉菌及酵母菌数.

3.5.2控制菌验证结论在三次试验中,阴性对照组未检出阴性对照菌,试验组检出阳性试验菌,故可用此供试液制备法和控制菌检查法进行氨金黄敏颗粒的控制菌检查.

四、讨论

1、许多药品本身的特性（如抑菌性）会对检验结果带来影响,需要对供试品进行适当的预处理,以消除其本身带来的干扰.

2、药品的微生物检查是保证药品使用安全的重要检查项目,必须对每个品种的检验方法进行验证.

3、试验过程中,应严格遵守操作规范,保证结果的可靠性.

参考文献

[1]邱成飞杜敏李延春,氨金黄敏颗粒微生物限度检查方法的验证,论文网,2011,07

[2]中国药品检验标准操作规程（2010版）：351.

[3]张冬,王兰卿.化学药品卫生质量考察及微生物限度检查法探讨[J].现代应用药学,1997,14（1）：44.转贴

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