生物技术类论文参考文献,关于忍冬干叶基因组DNA提取方法的相关毕业论文开题报告

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摘 要：目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA.方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量,并与鲜叶的提取效果比较.结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法,电泳条带清晰,完整性好,纯度高,能被EcoRⅠ完全酶切.从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异,且产率更高.结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取.

关 键 词 ：忍冬干叶；DNA提取；改良CTAB法

中图分类号：R282

文献标识码：A

文章编号：1673-7717(2008)03-0496-03

A Study on Methods for Extraction of Genomic DNA from Lonicera JaponicaThunb. Dry Leaves

WANG Ting1,ZHOU Feng-qin1,LI Jia1, ZHANG Yong-qing1,GUO Qing-mei1,XIA Yang2,LI Yan-yan2,YAN Li-ping2

(1.College of Pharmacy,Shandong University of Chinese Medicine, Jinan 250014,Shandong,China；

2.Shandong Academy of Forestry Science,Jinan 250014,Shandong,China)

Abstract：Objective：To extracthigh quality genomic DNA from Lonicera JaponicaThunb.dry buds with silica gel. Methods：Two different methods,conventional CTAB method and modified CTAB method,were applied to isolate genomic DNA from dry leaves of Lonicera Japonica Thunb.The DNA obtained was analyzed by the means of agarose gel electrophoresis,ultraviolet spectrophotometric method and enzymatic digestion.Results：Higher purity DNA was obtained by modified CTAB method and it can be digested by restriction enzyme EcoRⅠpletely. The DNA extracted from dry buds had no obviousdifferences with the DNA from fresh buds in quality and got higher yield. Conclusion：The modified CTAB method was suitable for the extraction of genomic DNA from Lonicera JaponicaThunb.dry leaves.

Keywords：Lonicera JaponicaThunb.dry leaves；DNA extraction；modified CTAB method

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera JaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花[1].山东是金银花的重要道地产区,长期的自然选择与人工选择,忍冬的种质发生了明显的变异与分化,形成了很多农家品种或品系[2].为了综合评价忍冬的种质资源,有必要在分子水平上对其遗传多样性进行分析,而基因组DNA的成功抽提是进行任何分子生物学研究的前提.常用的植物DNA提取材料是新鲜幼嫩叶片,然而受取样时间、交通运输条件等的限制,鲜叶往往得不到较好的保存,严重影响了所提DNA质量和下游操作.文献报道[3-6]用变色硅胶快速干燥法保存的材料提取DNA效果较好,且采样方便,样品可长期保存.因此,笔者在进行忍冬种质评价的AFLP分析时,以变色硅胶干燥叶片为材料,进行基因组DNA提取方法的研究,摸索出了适合忍冬干叶的DNA提取方法,从而为后续的采样工作和DNA模板的制备奠定了良好的基础.

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验材料 于2006年10月取自山东平邑,经山东中医药大学周凤琴教授鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera JaponicaThunb..取新鲜完整叶片按文献[7]方法用变色硅胶脱水干燥,同时取枝条扦插,用其萌发的幼叶作对照.

1.1.2试剂琼脂糖(Biowest)；CTAB(Sangon)；EDTA、Tris(济南朋远生物技术有限公司)；β-巯基乙醇(济南爱博经贸有限公司)；PVP-40(北京欣经科生物技术公司)；EcoRⅠ,DNA Marker DL 2000,λ-HindⅢ digest(TaKaRa)；其余试剂均为国产分析纯.

STE核分离缓冲液：100mmol/LTris-HCl(pH 8.0),50mmol/L EDTA(pH 8.0),700mmol/LNaCl,2% PVP(w/v),2%β-巯基乙醇(v/v).2×CTAB提取缓冲液：2%(w/v)CTAB,100mmol/LTris-HCl(pH 8.0),20mmol/L EDTA(pH 8.0),1.4mol/LNaCl,5% PVP(w/v),2%-巯基乙醇(v/v).10%CTAB溶液