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摘 要:目的:探讨空气微生物的检验措施.方法:通过实验室的科学检验,掌握空气微生物的属性与致病因素,总结出系统的检验措施和相应的控制方法.结论:科学准确的掌握空气微生物的检验措施,把握致病规律,才能为有效的控制和预防相关疾病提供可靠的依据.
关 键 词:空气微生物;检验;细菌
【中图分类号】R446.5【文献标识码】B【文章编号】1672-8602(2014)01-0188-01
存在于空气中的微生物.是主要的空中浮游生物.对较干燥环境和对紫外线具有抗性的种类,主要有附着于尘埃上的从地面飞起的球菌属(包括八叠球菌属在内的好氧菌);形成孢子的好氧性杆菌(如枯草芽孢杆菌);色串孢属等野生酵母;青霉等霉菌的孢子等.下面将空气微生物的检验技术分析汇报如下.
1各类微生物的基本检验程序
空气中微生物检验主要分为细菌、病毒、真菌、立克次体类的检验.
2几种常见空气微生物采样
方法及细菌菌落总数测定
2.1Andersen采样器
2.1.1构造:新型采样器是Andersenl958年研制而成由采样胶体、流量剂、压力计和抽气泵组成.
2.1.2特点:①采集空气微粒范围宽;
②采样效率高;
③生物失活率低;
④敏感性高;
⑤操作简便;
⑥应用范围广,常用于空气致病微生物的采集.
2.1.3操作步骤:①消毒
采样器的消毒方法有3种:75%酒精;高压蒸气灭菌:用于采样头的消毒;环氧乙烷消毒.
②有关参数设定:
流量,28.3L/min,固定流量抽吸空气,流量准确与否是该采样器操作的关键所在,流量不准或未经校正的采样器不可使用.真空度,0.1354kPa.若真空度不够,可影响气流速度,从而影响采样效率.
③平皿制备
采样用培养基平皿要提前一天准备好,每个样品需6个平皿,预置37℃18~24h培养,无细菌生长,即可用于采样.
④采样高度
根据采样目的而定,一般置于人的呼吸带高度,大约1.0~1.5m左右,并且采样人员应远离采样头.采集时间要根据现场微生物污染程度而定.
⑤培养
打开采样器,盖上平皿盖.细菌培养37℃培养48h,真菌培养28℃培养72h.
⑥菌落计数:计数方法可以采用分段计数及菌落计数器进行.一般以菌落形成单位表示.一般每个平皿最多不超过250cfu.
2.2THK-201型采样器
2.2.1构造:THK-201型采样器是在JWL型采样器基础上改进而成.基本构成包括:采样头、流量计、抽气泵、可调电路.
2.2.2特性:①采样头的筛孔(隙)为可调式;
②捕获率高;
③适应范围广,在不同环境通过调节筛孔来采集不同大小的微粒提高了其应用范围,可采集细菌、真菌、病毒、立克次体、原生动物、植物、花粉、藻类等,适用于环保、生物工程、医疗卫生、卫生防疫、工农牧业、食品加工业等;
④功能齐全.
2.2.3操作步骤:①平板制备
制作平皿培养基应注意厚薄均匀,保证无菌.琼脂浓度要较其他采样方法略高一点(≤2.4%),过高过低均会影响采样效率.
②仪器相关参数
电源,工作电压:220V;转速,选档,定时范围;流量,5~35L/min;采样筛头,最小狭缝≤20μm,
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③培养
方法和时间同Andersen采样器.
2.3自然沉降采样法
2.3.1特点:①简便易操作,不需特殊采样器,只需采样的平皿培养基.
②能反映沉降细菌的数量,特别是医院的烧伤外科、手术室、人流室等一些相对空气流动性不大,但空气中微生物在静止时下落到物表,造成污染,更严重的造成院内感染.
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③可用于粗略反映空气中细菌污染状况.
④此法不足之处:用下落菌推算空气中悬浮菌量,有推理上的错误.比较公认的是奥梅梁斯基的公式来推算浓度,他认为在100cm2培养基表面,5min内能落下约10L空气中所含菌量.标准细菌种类较少.采样条件要保证无菌状态,十分难以控制[1].
2.3.2自然沉降法采样的操作步骤:①培养基的制备:
一般采用9cm直径平皿制作.细菌用普通营养琼脂,真菌用沙堡培养基或察氏培养基.制备好的平板应置35~37℃预培养18~24h,选无菌生长的平皿用于采样.
②选择检测点:
室内面积≤30m2沿一对角线上取三点,即中间一点两端各距墙1m处各取一点,室内面积>30m2,设东、南、西、北、中5个点,各点均距墙1m,采样高度0.8~1.5m.若使用采样器监测时,采样器应距地面高度33cm,离门窗及人员流动1m以上,且采样器与采样者要保持一定距离(50cm),防止采样者自身细菌被吸入采样器而影响检测结果.室外采样要根据该地区气象、交通、大气污染程度、建筑物布局、有无树林等进行合理选点,选点数不定,每个点采样高度1.5m以上.可以一个点同时放置两个平皿,以平均菌落数代表该点的菌落数.
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③暴露平血时间:
原则是保证客观反映采样点情况,采样后平皿中生长的菌落数要便于准确计数,太多以至于无法计数将造成较大偏差,一般洁净室内暴皿时间可在5~30min,一般室内较洁净的地方,多采用暴皿5min即可.
④培养:
细菌样品35~37℃培养48h,真菌样品置28℃培养72h.
2.4JWL型采样器
2.4.1结构:由采样头、流量计、抽气泵、电源电路4部分构成.
2.4.2特点:①采样的平皿可以转动,使平皿上菌落均匀分布;
②交一直流两用,应用简便;
③自动按时采样,可采细菌和病毒;
④但对空气中占大多数的粒子捕获率低.
2.4.3操作步骤:①平皿制备
细菌用普通琼脂,真菌用选择性培养基(如察氏培养基).平皿要求厚薄均匀,表面水平,加培养基量4.5ml,琼脂浓度1.8%~2.4%为宜.
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②采样相关参数的调整
电源,220V,备24V直流蓄电池;流量调节,25~30L/min;空气压力,采样系统98~245kPa,电气系统为86.6~106.6kPa;采样时间,一次不得超过15min;采样高度,1.0~1.5m[2].
③培养
同Andersen采样法.
参考文献
[1]吴冬柠,韦彩娇,余波.百色城区高校大学生宿舍空气微生物的监测与分析.右江民族医学院学报,2013,35(05):667-667.
[2]谈书勤,胡贵方,顾大勇.空气微生物气溶胶富集、检测与空气消毒技术研究进展.中国消毒学杂志,2012,29(12):1115-1120.
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