橡胶树有关论文范文检索,与橡胶树AFLP体系的相关毕业论文题目范文

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【摘 要】以197个橡胶树杂交群体样本为材料,通过对影响AFLP技术的多种关键因素进行研究,建立了一套适合橡胶树的AFLP技术优化体系.其中优化的关键的因素为：(1)酶切-连接时DNA模板为250ng,反应体系采用各3UEcoRI/MseI/T4连接酶.反应时间为10h；(2)预扩增模板为稀释一倍的酶切连接产物,用量为1μL；(3)选择性扩增要用稀释倍数为40倍的预扩增产物.本研究为橡胶树遗传图谱的构建及育种的辅助选择提供有力的工具.

【关 键 词 】橡胶树,限制性内切酶,AFLP,银染

AFLP[1]技术,又称扩增片断长度多态性,是基于RFLP和PCR相结合的DNA分析技术.AFLP多态性强,非常适合遗传多样性分析[2]、快速遗传图谱构建等研究.橡胶树是多年生的高大乔木,普通育种期一般要经过8年的时间,常规育种的选育和改良品种技术对于橡胶树的更新换代是很难突破,现代分子生物学技术的出现,尤其是近代DNA基因改良技术的出现,加快育种目标的实现成为可能.用AFLP分子标记技术为橡胶树高产育种提供相应的分子辅助手段.但操作技术要求上高于其他方法由于该技术实验步骤比较繁杂,有许多因素会直接影响AFLP分析的效果.为了加快对橡胶树的研究,现代分子生物学也进入橡胶树育种的领域.为了使更好地把分子生物学应用在品种鉴别及辅助育种等工作上,建立起一套适合于橡胶树基因组AFLP标记分析的技术体系对于开展橡胶树遗传图谱的研究有着实践意义,为使AFLP研究分析结果更可靠、更准确,对橡胶树基因组AFLP分析的DNA模板构建和银染技术体系分别进行了分析和改良,进而使适合于橡胶树AFLP的研究体系更加完善.

为什么要写橡胶树毕业论文
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１．仪器与材料

仪器:恒温水浴锅、PCR仪、离心机、电泳仪、垂直电泳槽.

材料：橡胶树杂交群体样本群体（（873×GT1）样品、EcoRI \MseI接头、引物、Tag酶、EcoRI内切酶 \MseI内切酶\T4-DNA 连接酶及dNTP.

2.AFLP体系分析

2.1 酶切连接体系DNA模板制备

采用EcoRI、MseI双酶切组合, DNA模板片断与引物接头的连接.每个DNA模板样品酶切连接反应体系中混合液总体积约为20μL.如图(1)各成份加入后混匀,在恒温水浴锅37℃酶切连接12h过夜.取6μL酶切产物在琼脂糖凝胶（2%）检测结果.

Table1 完善酶切连接体系 Table2完善预扩增体系

2.2 预扩增体系

将连接完成后的DNA样品用0.1×TE稀释1倍后,进行预扩增.预扩增的反应体系为20μL,加入如图(2)所示10×buffer和酶切连接稀释后的DNA产物,MSeI引物(M00)和EcoRI引物(E00), Taq酶.各成份加入混合后在BIOMITRA- T1热循环仪上进行.热循环参数设置为:

(1)94℃3 min-(2)94℃30sec-(3)56℃40sec-(4)72℃80sec（goto step 2-30 cycles）-(5)72℃5 min

整个循环为３０,扩增生成物在琼脂糖凝胶（2%）跑电泳,然后检测结果.

2.3 选择性扩增

用稀释20倍的0.1×TE用于对预扩增产物进行选择性扩增,用于选择性扩增的体系为20μL, 选择扩增引物dNTP、10×PCR butter, DNAMSeI/EcoRI Taq酶以及预扩增稀释后的产物.混匀放入热循环仪上进行扩增.热循