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论文摘 要 ： 目的建立灵芝孢子粉软胶囊中多糖含量的HPLC测定方法.方法采用ShodexSH1011（苯乙烯二乙烯苯共聚物键合磺酸基）糖柱,流动相0.6%硫酸溶液,检测波长200 nm.结果灵芝多糖在0.266～8.51 mg/ml范围内线性关系良好,r等于0.999 8,平均加样回收率为100.4%（n等于9）,RSD等于1.57%.结论 该方法简便快捷,无干扰,重复性好,可用于灵芝孢子粉软胶囊的质量控制.

主题词： 灵芝孢子粉软胶囊 灵芝多糖 测定

中图分类号：O657.91

灵芝孢子粉软胶囊是由灵芝孢子粉胶囊[WS5026（B0026）2004]改剂型而成,具有健脾益气,养心安神功效.用于心脾两虚,病后体弱以及肿瘤患者的辅助 治疗 .其有效成分有灵芝多糖类、三萜类化合物等,其多糖的含量约为0.75%.测定多糖含量常用硫酸-蒽酮和硫酸苯酚分光光度法.上述方法误差较大、操作比较繁琐.运用高效液相法测定多糖含量亦有报道,灵芝孢子粉制剂中运用高效液相色谱法测定多糖含量未见报道.本文选用高效液相色谱法为灵芝孢子粉软胶囊中灵芝多糖的含量测定建立了一种分离效率高、稳定性好、分析速度快的方法,为控制制剂质量提供了可靠的方法.经方法学考察,符合含量测定要求.

为什么要写多糖毕业论文
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1.仪器与试药

岛津LC10A高效液相色谱仪,SPD10Avp紫外-可见检测器,N2000色谱数据工作站,KQ500DB型数控超声波清洗器,7725i六通进样阀.

D无水葡萄糖对照品（ 中国 药品生物制品检定所,批号110833200302,供含量测定用）；灵芝孢子粉软胶囊（南京中科药业有限公司,批号20050301,20050302,20050303）硫酸分析纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯.

2.方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ShodexSH1011（苯乙烯二乙烯苯共聚物键合磺酸基）（8.0 mm×300 mm,6 μm）, 流动相：硫酸水（6∶1 000）,检测波长200 nm,流速0.6 ml/min,进样量20 μl,柱温30℃.在上述色谱条件下,D无水葡萄糖的保留时间为4.987 min.

2.2 供试品溶液与对照品溶液的制备

取本品10粒内容物混合均匀,取约3.0 g,精密称定,置于10 ml玻璃离心管中,加正己烷8 ml,震荡2 min后,离心（3000 r/min） 10 min,弃去正己烷层,再重复上述步骤一次,水浴挥去残留正己烷后,将其转移至10 ml容量瓶中,加适量水,100℃水浴1 h,不足水分,混匀,滤过,取滤液2.0 ml加入无水乙醇8.0 ml,摇匀并放置2 min后,离心（3 000 r/min）10 min,弃去上清液,沉淀物用2.0 ml流动相溶解后100℃水浴1 h即得.分别进行了水解时间的考察.

结果1h以上即可完全水解,故选择1h作为水解时间点.

精密称定减压干燥48 h的D无水葡萄糖对照品21.28 mg,置10 ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含D无水葡萄糖2.128 mg的溶液,滤过,即得.

对系统适应性进行了实验考察.

2.3 线性关系的考察

精密吸取对照品溶液5 ml于10 ml容量瓶中稀释定容,依次用二倍稀释法配制的对照品溶液,照上述色谱条件,精密吸取20 μl 注入液相色谱仪,连续进样2次,测定.以峰面积为纵坐标（Y）,以样品浓度为横坐标（X）,绘制标准曲线.得回归方程Y等于321 56X+4 999.2,相关系数r等于0.999 8,线性范围为0.25～8.00 mg/ml.

2.4 精密度实验

精密吸取对照品溶液取,连续进样6次,测得RSD值为0.6%（n等于6）,符合实验要求.

2.5 稳定性实验

取同一样品（批号20050401）,按2.2项方法制备,照上述色谱条件,精密吸取20 μl注入液相色谱仪,每隔2.5 h进样1次,测定供试液12.5 h的稳定性.其RSD值为0.2%,符合实验要求.

2.6 重复性实验

取同一样品（批号20050401）6份,按2.2项方法制备,分别精密吸取20 μl,连续进样2次,测得RSD值为1.5%,符合实验要求.

2.7 加样回收率实验

取同一样品（批号20050401）9份,加入一定量的对照品,按2.2项方法制备,即得.分别精密吸取20 μl 注入高效液相色谱仪,连续进样3次,测定. 计算 平均加样回收率为100.4%,其RSD值为1.57%,符合实验要求.

2.8 药材含量测定

取不同批号灵芝孢子粉药材约1.0 g,精密称定,按2.2项方法依法制备,每次进样20 μl测定.

4种不同批号的灵芝孢子粉药材因来源不同其含量有一定的差别,由于对灵芝孢子粉药材多糖含量没有现行的法定标准,生产中应制定内控标准,进行严格控制,其平均含量为114.40 mg/g,下浮20%作为内控标准91.52 mg/g.

2.9 样品含量测定

分别取10批（批号20050401,20050402,20050403,20050501,20050502,20050503,20050504,20060301,20060302,20060303）的样品10粒内容物,取约3.0 g,精密称定,按2.2项方法制备,即得.精密吸取供试品溶