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【摘 要 】 目的 探究乌榄叶水提取物对大鼠离体心脏的冠脉流量、心肌收缩力及心率的影响.方法 采用Langendorff离体心脏灌流法, 通过MedLab生物信号采集处理系统, 观察药物对正常大鼠离体心脏的冠脉流量、心肌收缩力及心率的作用.结果 乌榄叶水提取物对大鼠冠脉流量作用效果与丹参的类似, 与生理盐水空白组比较差异有统计学意义, 具有稳定和增加冠脉流量作用, 给药后前6 min表现为加强心肌收缩力作用, 而后均逐渐减弱恢复.心率在整个过程中持续下降, 且下降速率快.结论 乌榄叶水提取物对冠脉流量和心肌收缩力具有先增加后减少至给药前状态的双向作用, 并有较快、较强的慢心率作用.结果提示乌榄叶可能有利于降低心脏耗氧量, 维持心功能, 起保护心肌的作用.
【关 键 词 】乌榄叶水提取物；离体心脏灌流；冠脉流量；心肌收缩力
乌榄（Canarium Pimela Leeth）系橄榄科常绿大乔木, 其果实可供生食, 且有止血、利水、解毒等功效.其根叶具有舒筋活络、袪风除湿、清热解毒, 消肿止痛等功效.相关实验研究发现, 乌榄叶水提物对蛙心心肌收缩力有快速、显著的减弱作用[1]；对正常大鼠和应激高血压大鼠都具有显著的降压作用, 其中对异常血压的作用更强[2, 3]；对大鼠血管平滑肌有显著舒张作用[4]和对心功能具有双向性[5].为进一步探讨其对心功能及冠脉流量的作用, 本实验采用Langendorff离体心脏灌流装置观察乌榄叶水提取物对正常离体大鼠心脏的影响.
1.材料
1. 1 药品试剂 乌榄叶水提取物由广东药学院药物化学教研室提供.实验时用蒸馏水稀释, 经3000 r/min离心30 min后取上清液, 调试pH值至7.0, 用0.22 μm一次性微孔过滤器滤过, 取滤液配成相关浓度药液进行药效观测.丹参注射液, 正大青春宝药业有限公司生产, 批号：1111022.
1. 2 仪器 MedLab生物信号采集处理系统（南京美易公司生产）、YP100张力换能器、langenendorff灌注装置.
1. 3 实验动物 SPF级SD大鼠, 雌雄各半, 体重（250±50） g, 由广东省动物实验中心提供.
2.方法
2. 1 实验分组 24只SD大鼠随机分为3组, 每组8只.分别为空白对照组、乌榄叶水提取物组（简称乌叶组）、丹参阳性对照组（简称丹参组）.给药方法
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2. 2 实验方法 腹腔注射肝素（1000 U/kg）, 15 min后断头迅速开胸暴露心脏, 保留1 cm左右主动脉, 摘取心脏于含氧冷任洛氏液的玻璃器皿内, 排空残留血液, 将主动脉固定于Langendorff灌流装置的心脏套管上, 用95%O2与5%CO2饱和的任洛氏液进行灌流, 经张力换能器连接MedLab生物信号采集处理系统.稳定10 min待心率及心肌收缩力恢复正常, 继续灌流40 min.其中前10 min作为前对照, 后30 min分别给予相应药物浓度的含氧任洛氏液持续灌流, 记录心肌收缩张力、冠脉流量和心率, 观察记录给药前及给药后各值变化情况.
2. 3 统计学方法 实验数据以x-+s表示.用SPSS19.0系统进行统计学分析, 前后对照用配对t检验, 组间对照用方差分析.
3.结果
3. 1 乌榄叶水提取物药效与冠脉流量的关系 从表1可见, 在灌流药物的过程中, 乌榄叶水提取物组的冠脉流量均有所增加.在第10分钟至第15分钟作用最显著, 与空白对照组比较有显著统计学意义.同时可见给予药物灌流第15分钟后, 空白组大鼠冠脉流量出现逐渐减少, 而乌榄叶水提取物组和丹参阳性对照组均无出现此现象.表明：乌榄叶水提取物可能对冠状动脉具有一定的保护作用, 并且可能对冠脉具有一定舒张作用, 从而能维持冠脉流量基本恒定, 避免其减少, 其作用效果与丹参的类似.
3. 2 乌榄叶水提取物药效与心肌收缩力的关系 结果表明（见表2）, 在给予灌流液后第4分钟, 乌榄叶水提取物组心肌收缩力与给药前相比增强（P<0.05）, 并于第6分钟, 达到峰值, 与空白组和丹参组比较差异具有统计学意义（P<0.01）, 而且有别于此时丹参阳性对照组心肌收缩力减少的现象.此外, 在10分钟后, 乌榄叶水提取物组心肌收缩力有所回落, 与给药前差异无统计学意义, 作用持续时间约20分钟.结果提示：乌榄叶水提取物可增强心肌收缩力.
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3. 3 乌榄叶水提取物药效与大鼠心率的关系 从表3观察到, 在灌流药物第4分钟后, 乌榄叶水提取物组心率持续降低, 与给药前相比具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）, 并且其下降幅度高于同期空白组, 此外, 其下降幅度于第4分钟和第6分钟显著高于丹参组（P<0.01）, 而第10分钟后, 其降低效果与丹参组类似.结果表明：乌榄叶水提取物具有较强的降心率作用, 并且起效快于、强于丹参注射液.
4.讨论
在开发心血管药物时, 研究药物对离体心脏的冠状动脉及心功能的影响具有重要的地位.目前, Langendorff离体心脏法是研究药物对冠状动脉的影响的常用手段, 其优势在于可排除神经及体液等因素而得到药物对冠状动脉以及心脏代谢的直接药理作用.
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实验中发现, 空白对照组冠脉流量及心肌收缩力分别于第15分钟和第10分钟出现负值, 并且心率伴随实验过程持续下降.其原因可能是持续灌流后, 心肌组织发生水肿, 导致其功能出现衰退, 此外, 血管在长时间离开神经及体液等因素调节后而发生收缩, 导致心肌供氧不足, 功能减退[6].而乌榄叶水提取物组的冠脉流量及心肌收缩力均有增强作用, 并且两者在实验过程中均高于或略高于给药前的现象, 作用维持约20分钟.此外, 乌叶水提取物还具有较强、较快的慢心率作用.该现象与丹参阳性药物对照组维持冠脉流量、降低心率和相对稳定心功能的药理作用相类似.结果表明乌榄叶水提取物具有维持冠脉流量和心功能相对稳定作用, 该作用原理可能是由于乌榄叶水提取物减弱细胞外Ca2+内流, 使胞浆Ca2+减少而使血管平滑肌舒张, 减少冠脉血管阻力[1,2], 从而增加冠脉流量, 增加心肌供氧量；同时心率下降可使心脏做功减少而减少耗氧量, 从而使得心脏代谢处于正常状态, 维持心功能相对稳定.此外, 乌榄叶水提取物对冠脉流量及心肌收缩力具有先增加后减少至给药前状态的双向药理作用, 该作用可能与此前有报道指出该药物具有增强和减弱心功能的双向药理活性有关[5], 但具体成分尚不清楚, 有待开发.
综上所述, 乌榄叶水提取物对大鼠离体心脏具有降低心率、对心肌收缩力及冠脉流量均有先增加后恢复的双向药理作用, 在全灌流过程中冠脉流量和心功能始终维持相对稳定.结果提示, 乌榄叶水提取物可能对治疗心力衰竭、心肌梗死及心动过速等疾病具有一定的疗效, 但其具体作用机制及有效成分尚未明确, 仍需要作进一步探究.
参考文献
[1] 梁燕玲, 董艳芬, 罗艳, 等. 乌榄叶水提取物对心脏负性变力作用的实验研究. 医学理论与实践, 2006,19（7）：745-746.
[2] 梁燕玲, 董艳芬, 罗艳, 等. 乌榄叶水提物对大鼠血压和心率的实验研究. 江西医学院学报, 2006, 46（3）：42-45.
[3] 董艳芬, 梁燕玲, 王建红, 等. 乌榄叶水提物对应激性高血压大鼠降压作用的研究. 天津医药, 8（35）：587-590.
[4] 董艳芬, 梁燕玲, 罗艳, 等. 乌榄叶对血管平滑肌的作用及机制探讨. 广东医学, 2008, 29（11）：1780-1783.
[5] 岑柏宏, 江维宁, 刘萍芬, 等. 乌榄叶水提取物对心脏血流动力学的作用探究. 医学理论与实践杂志社, 2012, 25（7）：143.
[6] 陈玉玲, 赵连根, 陈琪. 活血化瘀注射液等对离体大鼠冠脉流量、心缩力及收缩频率的影响. 天津中医, 2000, 17（2）：33-34.
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