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【关 键 词 】骨髓组织；脱钙液；改进方法
由于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬,不能直接进行石蜡制片,而经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色.脱钙过度或不当均可影响上述染色.因此,脱钙时间和脱钙液的选择十分重要.传统的方法用14%硝酸脱钙液脱钙常出现脱钙过度或不足,难以掌握,常造成组织切片不完整、组织结构破坏、细胞模糊不清,以致医生阅片时诊断困难甚至误疹.为此,近一年来,笔者用4%盐酸脱钙液,代替原有14%硝酸脱钙液,进行骨髓组织脱钙,取得到了比较好的效果,也避免了用塑料包埋切片后,不能进行免疫组化染色的不足.现将方法介绍如下.
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1.材料和方法
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关于骨髓方面论文范文
1．2 方法 第1天：新鲜的骨髓标本立即置于10%甲醛液固定（过夜）.第2天：08：00上班,立即置于4%盐酸脱钙（3．5～4 h）：稍水洗.11：30置于70%乙醇30 min；12：00流水冲洗2．5 h,然后转入10%甲醛液补充固定.17：30分将骨髓标本与当天标本一起放入全封闭自动脱水机中脱水.第3天：石蜡包埋、切片、染色、出片交医生发报告.
2.结果
与以往用１４％硝酸脱钙相比,骨髓切片完整,细胞形态保存良好,染色鲜艳,核质对比清晰,并且免疫组化染色得到的效果较好.见图1~4.将骨髓组织,在固定充分的情况下进行14％硝酸与4％盐酸脱钙的比较,见表1.
3.讨论
过去,骨髓组织制片多采用甲基丙烯酸乙基（ＨＥＭＡ）等特殊包埋剂包埋,不需经脱钙处理可进行切片ＨＥ染色,但操作类烦琐也不能作免疫组化染色,因此, 笔者这样脱钙处理进行石蜡切片的技术方法,以满足临床病理诊断免疫组化辅助的需要.常规骨组织脱钙主要采用14％硝酸脱钙,但硝酸对骨髓组织破坏极大,免疫组化染色效果不佳.
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实践证明,过去用的14%硝酸对骨髓组织脱钙,具有作用快,脱钙能力强的特点,但由于硝酸是强酸,往往对骨髓组织脱时间不易控制（以大头针能刺入骨髓组织无阻力感为标准来衡量脱钙时间）,常出现脱钙不足或脱钙过度等状况.脱钙时间过长,骨髓组织破坏,结构模糊不清或者无法制片；脱钙时间过短,脱钙不充分,骨髓组织较硬,以致无法制造出完整的切片.
医院早上送来的骨髓组织,往往是刚刚穿刺的新鲜标本,固定时间还不够.需要进上步固定过夜,这样做与当天穿刺当天取材制片的比较,切片完整,厚薄均匀,细胞结构保存良好,免疫组化、特染染色效果较好.相反,固定时间不够的骨髓组织,无论在切片、HE染色、特殊染色和免疫组化中,染色效果都不理想.以致病理医生难以作出诊断,拖延了病理报告发出的时间,甚至造成误诊.
由于骨髓组织富含钙盐、纤维支架少,组织具有硬、脆、疏松的特点,4%盐酸脱钙液酸度比硝酸脱钙液酸度比硝酸脱钙液浓度较低,因此采取延长脱钙时间的做法,使脱钙过程缓慢而较持久地进行（脱钙时间一定不能少于4 h,以大头针能穿过无阻力为准,骨髓组织脱钙才算完成）.流水冲洗一定要充分,如果冲洗时间不够,骨髓组织带有酸性,HE染色时胞核着色偏浅,核质对比不清晰,免疫组化假阳性率高.因此流水冲洗时间不能少于2．5 h.
盐酸会使组织膨胀,而酒精对组织具有收缩作用.因此,脱钙后将组织放入70％乙醇作用30 min,以减低盐酸对组织影响.经过一段时间的反复比较和实践,用4％盐酸脱钙的方法能使骨组织切片、ＨＥ染色、特殊染色和免疫组化染色达到较稳定的效果,达到优质骨髓切片标准有助于诊断,得到到广大病理医生的认同.值得大力推广.
参考文献
［1］ 胥维勇,杨群．脱钙方法与脱钙的选择及应用．中国组织化学与细胞化学杂志,2002,11（3）：263．
［2］ 蔡秀玲,骆新兰,张威,等.骨髓穿刺活检标本石蜡切片的质控.诊断病理学杂志,2005,12（5）：392．
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