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【摘 要 】目的:利用,以穗花杉双黄酮为对照品,测定十三批次的竹柏和竹柏叶中穗花杉双黄酮的含量.方法:高效液相色谱法,以Agilent Hypersil ODS C18柱(4.6mm*150mm,5μm),乙腈-0.05%磷酸水液为流动相,梯度洗脱,检测波长为310nm.流速1.0ml/min,柱温20℃.结果:竹柏叶中穗花杉双黄酮含量在0.1618mg/g～0.5721mg/g之间,显著高于长叶竹柏叶(0.039mg/g～0.1304mg/g).结论:本法结果准确,操作方便,可作为竹柏和长叶竹柏叶质量控制方法的参考,穗花杉双黄酮在两者中含量差异明显,可作为两者理化鉴别参考.

【关 键 词 】竹柏,长叶竹柏,穗花杉双黄酮,HPLC,含量测定

罗汉松科竹柏Podocarpus nagi (Thun. ) Zoll et Mor和长叶竹柏PodocarpusfleuryiHickle具有较强的抗肿瘤作用,均含有穗花杉双黄酮,且含量较高[1].为了控制竹柏和长叶竹柏的内在质量,参考文献[2、3]的方法对其共有的特征性成分穗花杉双黄酮进行含量测定研究.

1材料与仪器

1.1仪器Agilt 1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司),BS124S电子分析天平(德国Sartorius), BP211电子分析天平(德国Sartorius),超声清洗器(北京医疗设备二厂).

1.2试药乙腈为色谱纯,磷酸、甲醇等均为分析纯,水为三蒸水.穗花杉双黄酮对照品由广东省中医研究所提供,纯度为99.8%.

1.3样品竹柏叶和长叶竹柏叶均采集于广东省广州市,原植物经广东省中药研究所蔡岳文副主任中药师鉴定,分别为罗汉松科竹柏Podocarpus nagi和长叶竹柏Podocarpusfleuryi.经水分测定,鲜品竹柏叶含水量约33.7%,鲜品长叶竹柏叶含水量约53.4%.

2方法与结果

2.1方法

2.1.1对照品溶液的制备精密称取穗花杉双黄酮对照品,加甲醇溶解,制成0.013mg/ml的对照品溶液.

2.1.2供试品溶液的制备分别取药材样品,剪碎,取0.5g,精密称定,加50%乙醇10ml,称重,超声提取35分钟,取出,放冷,称重,补足损失的重量,摇匀,滤过,滤液做为供试品溶液.

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2.1.3含量测定Agilent Hypersil ODSC18柱(4.6mm*150mm,5μm),乙腈-0.05%磷酸水液为流动相,梯度洗脱,检测波长为310nm.流速1.0ml/min,柱温20℃.理论塔板数按穗花杉双黄酮计应不低于5000.

2.1.4线性范围的考察分别精密吸取对照品溶液1、2、5、8、10μl进行色谱测定,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量(X,μg)对峰面积(Y , A)进行线性回归,得标准曲线.结果显示,进样量在0.013～0.130μg范围呈线性关系,回归方程为y 等于 3273.1x + 1.2429,相关系数R2等于 0.9998.

2.1.5精密度试验 精密吸取样品溶液10μl,按上述色谱条件,重复测定6次,测得