盐酸氨溴索吸入剂的细菌内毒素检查方法研究

盐酸氨溴索吸入剂的细菌内毒素检查方法研究

【摘要】建立盐酸氛澳索吸入剂的细菌内毒素检查方法。【关键词】盐酸氨溴索吸入剂细菌内毒素干扰试验方法：依照《中国药典》2015年版二部附录细菌内毒素检查法试验和结果判断，采用稀释法进行试验。
结果：以细菌内毒素检查用水对盐酸氨溴索吸入剂进行稀释，对鲎试剂与内毒素反应最大不产生干扰的浓度为0.1mg?ml-1，本文选择的不干扰浓度为0.025mg?ml-1，使用0.125EU?ml-1的鲎试剂可对其进行细菌内毒素检查。
结论：本细菌内毒素检查法多次试验结果均符合规定，可用于其质量控制。
盐酸氨溴索为目前临床上应用最广的一种黏痰溶解剂，其能刺激肺泡，减少呼吸道粘液腺分泌，降低痰液及纤毛的粘着力，并增加支气管纤毛的运动，使黏痰易于咳出。
盐酸氨溴索于1979年由德国勃林格殷格翰公司研发上市，并在日本、欧洲等较多国家上市。雾化吸入用于治疗急慢性肺部疾病的效果具有局部起效，见效快，副作用小等优点。本文针对盐酸氨溴索吸入剂的细菌内毒素检查方法进行研究。
一、实验材料
盐酸氨溴索吸入剂（德国勃林格殷格翰国际有限公司，批号42207536，42207537，42207538）；细菌内毒素工作标准品（WSE）；鲎试剂（TAL，0.25EU?ml-1，湛江安度斯生物有限公司；0.125EU?ml-1，湛江安度斯生物有限公司；0.125EU?ml-1，湛江博康海洋生物有限公司）；细菌内毒素检查用水（BET，湛江安度斯生物有限公司）。
二、方法与结果
（1）细菌内毒素限值的确定L=5EU?ml-1。
（2）鲎试剂灵敏度复核参照药典四部细菌内毒素检查方法，进行鲎试剂的灵敏度复核试验三种鲎试剂的灵敏度均在0.5λ～2λ之间，可用于细菌内毒素检查。
（3）干扰预试验现有鲎试剂灵敏度分别为0.25，0.125，0.06EU?ml-1。MVD=cL/λ，L=5EU?ml-1，计算可得，盐酸氨溴索吸入剂的有效稀释浓度为0.1～0.012mg?ml-1。选取标示灵敏度为0.25EU?ml-1的鲎试剂进行干扰预试验。以BET水对供试品原液进行稀释，使其终浓度分别为2，1，0.1，0.05，0.025，0.0125mg?ml-1，将浓度为1，0.1，0.05，0.025，0.0125mg?ml-1系列溶液记为NPC；同时在浓度为2，1，0.1，0.05，0.025mg?ml-1溶液中添加等体积4人浓度的内毒素溶液，使每一浓度试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，将此系列溶液记为PPC。取灵敏度为0.25EU?ml-1，的TAL试剂，分别与上述NPC和PPC溶液进行反应，每一浓度重复做2管。实验结果表明，最高不干扰浓度为0.1mg?ml-1。
（4）正式干?_试验依据上述预实验结果，可知三种灵敏度的鲎试剂均可用。选择0.125EU?ml-1的鲎试剂进行试验，相应的浓度为0.025mg?ml-1。以BET水将三批盐酸氨溴索吸入剂原液分别稀释至终浓度为0.05mg?ml-1和0.025mg?ml-1，以0.025mg?ml-1溶液作为供试品对照液，试验重复2管。用0.05mg?ml-1的氨溴索溶液将细菌内毒素溶液（WSE）配成浓度为2λ，λ，0.5λ和0.25λ四个系列浓度（即WSE浓度分别为0.25，0.125，0.06，0.03EU?ml-1），试验重复4管，此系列为氨溴索系列。用BET水将WSE配成2λ，λ，0.5λ和0.25λ四个系列浓度，试验重复2管，此系列为BET水系列。同时以BET水为阴性对照，试验重复2管。用湛江安度斯生物有限公司和湛江博康海洋生物有限公司生产的灵敏度为0.125EU?ml-1的TAL进行干扰试验。当供试品对照夜和BET水均为阴性时，结果按公式Eg=1g-1（∑Xs/4）和Et=1g-1（∑Xt/4）计算，其中Xs和Xt分别为BET水系列和氨溴索系列各反应终点细菌内毒素浓度的对数值。干扰试验结果见表1和表2。
结果表明，阴性对照为阴性且Es在0.5λ～2λ之间，试验有效。Et在0.5λ～2λ之间，符合规定。吸入用盐酸氨溴索以BET水稀释至0.025mg?ml-1浓度时对内毒素与鲎试剂的凝集无干扰作用。
参考文献：
[1]闫冉，陆慧等.一种吸入用盆酸氨溴索溶液[Z].专利，2017.
[2]范倩倩，张波等.注射用盐酸氨溴索的临床应用现状与思考[J].中国药学杂志，2015.